ЛЕЙШМАНИИ (РОД LEISHMANIA)

Являются паразитами позвоночных животных и человека, в организме которых они встречаются в лейшманиальной или амастиготной (внутриклеточной, безжгутиковой) форме

Рис.

а — лейшманиальная (внутриклеточная) форма; б — лептомонадная форма.

(рис. 8, а). Вторым хозяином в их жизненном цикле являются москиты — переносчики лейшманий. B организме москитов паразиты обитают в лептомонадной или промастиготной (жгутиковой) форме (рис. 8, б). Такую же форму имеют лейшмании при культивировании их на искусственных питательных средах (например, NNN-arap).

Лейшмании — возбудители висцерального и кожного лейшманиозов. Эти заболевания встречаются в Советском Союзе в Закавказье и республиках Средней Азии, преимущественно в Туркмении.

Паразитологическая диагностика. Для выявления лейшма- ний готовят тонкие мазки на предметных стеклах. Материал для исследования от больного кожным лейшманиозом берут из нераспавшегося бугорка или из краевого инфильтрата вокруг язвы. Сначала пораженный участок кожи обескровливают, сжимая его между большим и указательным пальцами левой руки, затем на этом участке производят надрез эпидермиса скальпелем и его концом соскабливают кусочки ткани со стенок и дна разреза. Материал соскоба вместе с каплями серозной жидкости переносят на предметное стекло и осторожно размазывают, избегая излишней травматизации клеток.

У больного висцеральным лейшманиозом для изготовления мазков берут пунктат костного мозга и лимфатических желез. Для получения материала обычно пользуются пункцией грудины. Фиксация и окрашивание препаратов производятся так же, как и при исследовании крови на плазмодии малярии.

Часть пунктата костного мозга засевают на питательную среду. Для этой цели обычно пользуются средой NNN-arap (подробнее см. стр. 68).

Исследуемый материал (1—2 капли) вносят в конденсационную жидкость каждой пробирки, после чего посев помещают в термостат (22°).

При кожном лейшманиозе материал для посева берут из инфильтрата или из краев язвы после предварительной обработки ее спиртом или раствором йода. Прокол производят толстой иглой или пастеровской пипеткой; последнюю вводят в отверстие, предварительно проделанное иглой. Содержимое пипетки переносят в пробирки с питательной средой и выдувают в конденсационную жидкость, омывающую поверхность агара. Можно также произвести надрез эпидермиса у краев язвы скальпелем (предварительно обескровив этот участок, сжимая его пальцами) и его концом сделать соскоб со стенок надреза и посеять на питательную среду. Рост лейшманий начинается на агаре над конденсационной жидкостью. Отсюда и берут материал для исследования, осторожно соскабливая лейшманий пипеткой или петлей.

Через 8—10 дней после посева обычно наблюдается обильный рост лейшманий и пробирки с культурой переносят из термостата и хранят при комнатной температуре (18°). Без регулярного пересева культуры погибают, поэтому рекомендуется делать пересевы через каждые 25—30 дней. Если культуры хранятся при 20°, то пересевы целесообразно делать через каждые 15 дней.

Изучение препаратов. B организме человека (как и у других позвоночных, например, у собак) паразиты локализуются в цитоплазме гистофагоцитарных клеток. B процессе изготовления мазков эти клетки повреждаются или разрушаются и лейшмании из них освобождаются, поэтому нередко паразиты на препаратах находятся внеклеточно. Встречаются также отдельные особи или их скопления в обрывках цитоплазмы разрушенных клеток.

Лейшманиальная форма паразита овальная или круглая имеет размеры 3—5X1—3 мкм. B центральной части расположено ядро, около него лежит палочковидный или овальный кинетопласт. Жгутик отсутствует.

При окрашивании по Романовскому — Гимзе цитоплазма паразита красится в серовато-голубой цвет. Ядро и кинетопласт— в красновато-фиолетовый. При этом более интенсивно окрашивается кинетопласт. B толстых участках препарата цитоплазма плохо прокрашивается, поэтому обычно виден лишь контур лейшмании и в центре ядро с кинетопластом.

Размножаются паразиты в цитоплазме ретикулоэндотели- альных клеток делением надвое. Сначала делится кинетопласт, затем ядро и цитоплазма, и образуются две особи. Когда число лейшманий в клетке достигает многих десятков, ее растянутая оболочка разрывается и паразиты освобождаются.

Лептомонадная форма из культуры на окрашенных мазках удлиненная, веретеновидная с размерами тела 10—20X X5—6 мкм. Задний конец паразита несколько закруглен, передний— заострен. B переднем конце тела располагается кинетопласт. От него отходит красно-фиолетовый жгутик длиной 15—20 мкм. B средней части тела лежит круглое или овальное ядро. Размножаются они продольным делением в той же последовательности, какая описана у лейшманиальных форм. Жгутик материнской особи сохраняется, а рядом формируется новый. B старых культурах лептомонады нередко собираются кучками в виде розеток (жгутиками, обращенными к центру).

Для диагностики висцерального лейшманиоза применяется также формоловая реакция Непира. Для ее постановки берут в маленькую агглютинационную пробирку 1 мл сыворотки крови больного и прибавляют к ней каплю 40% формалина. При положительной пробе сыворотка свертывается (желати- низируется) и приобретает белый цвет; скорость свертывания (от 3 мин до 24 ч) зависит от длительности течения заболевания: чем больше срок болезни, тем быстрее наступает реакция. Положительные результаты в этой реакции наблюдаются на 2—3-м месяце болезни.