ПЦР-АМПЛИФИКАЦИЯ С ДНК-ЗОНДАМИ ФЛУОРЕСЦЕНТНО МЕЧЕННЫМИ ДФ-520/560
Способ детекции продуктов амплификации основан на гибридизации олигонуклеотидных зондов (искусственно синтезированных участков ДНК) с продуктами амплификации, содержащими ту или иную метку, детектируемую специальными приборами.
В этом случае чаще всего используют плашечный формат и систему детекции, аналогичную используемой в ИФА. Гибридизационные методы не получили пока широкого распространения из-за их дороговизны, длительности и трудоемкости методических манипуляций. Однако они интересны с точки зрения массового скрининга, т.к. при наличии соответствующего оборудования могут быть легко автоматизированы.Конструкция гибридизационных зондов
u 
Олигонуклеотид: на одном конце присоединена флюоесцентная метка, на другом – гаситель
u Эффект переноса энергии (гашение флуоресценции)
u 5’-экзонуклеазная aктивность Taq-полимеразы расщепляет зонд
Преимущество флюоресцентной детекции – отсутствие контаминации
u Устраняется угроза контаминации специфическими продуктами ПЦР
u Снижаются требования к организации процесса
u Снижаются вероятные субъективные ошибки
u Сокращается количество помещений
u Сокращаются трудозатраты и время анализа
u Автоматизация регистрации результатов
Еще по теме ПЦР-АМПЛИФИКАЦИЯ С ДНК-ЗОНДАМИ ФЛУОРЕСЦЕНТНО МЕЧЕННЫМИ ДФ-520/560:
- ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА №6 Тема: ПЦР-амплификация с ДНК-зондами флуоресцентно меченными ДФ-520/560
- Протокол Амплификация полной кодирующей последовательности гена флуоресцентного белка Clavularia
- Задача 3. Амплификация 3'-концевого участка гена флуоресцентного белка из кораллового полипа Clavularia (3'- RACE)
- Задача 4. Амплификация, клонирование и экспрессия гена флуоресцентного белка Clavularia, отбор целевых клонов
- Амплификация полной кодирующей последовательности целевого гена. Клонирование и экспрессия гена флуоресцентного белка в бактериальной системе экспрессии (задача 4)
- 10.3. Электрофорез ПЦР-амплифицированной ДНК в денатурирующем полиакриламидном геле.
- ПОДГОТОВКА КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ПЦР-ДИАГНОСТИКИ. ПОДГОТОВКА МОКРОТЫ И МОЧИ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ДНК
- Nested ПЦР и Step-out ПЦР
- 520. САМЛК1 - РЫБА
- 11.3. Получение меченого зонда.