11.3. Получение меченого зонда.
Детекцию исследуемых последовательностей проводили с помощью гибридизации с радиоактивно-меченным зондом. Для получения меченого зонда реакционная смесь (12 мкл) содержала 12 нг ДНК, 10 пмоль гексапраймера, 1.2 мкл 10 буфера, 0.5 М смесь нуклеотидов dTTP, dCTP и
32
dGTP, 12.5 мкКи a- P-dATP (Обнинск, Россия), и 3 ед.
акт. ДНК-полимеразы Кленова ("Fermentas", Литва). Смесь ДНК - гексапраймер предварительно выдерживали в кипящей водяной бане в течение 5 мин, затем быстро охлаждали на льду и добавляли остальные компоненты реакционной смеси. Реакцию синтеза проводили в течение 1 час при 37оС. Очистку32
радиоактивно-меченного зонда от свободного a- P-dATP проводили на мини-колонке с Sephadex G50 fine, уравновешенной 1 буфером STE с использованием в качестве маркера молекулярного веса Dextran blue. Активность зонда определяли с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика. Для гибридизации использовали зонд с удельной активностью > 108 имп/(мин>
Еще по теме 11.3. Получение меченого зонда.:
- Биотехнологический способ получения стабильно меченых БАВ
- Получение стабильно меченных БАВ химическими методами
- Получение меченных БАВ и их использование в биологии и медицине
- Разработка метода синтеза и получения радиоактивно меченных тритием образцов пептида HLDF-6
- Постановка желудочного зонда
- Применение иных изотопных вариантов, стабильно меченных БАВ
- Реакции с использованием меченых антител
- Использование в исследованиях множественно изотопно меченных БАВ
- Использование 18О-меченных БАВ
- Метилотрофные микроорганизмы как продуценты изотопно меченных БАВ
- Исследование фармакокинетики и фармакодинамики амидной формы нейропротекторного пептида HLDF-6 с использованием равномерно меченных изотопами водорода соединений
- ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА №6 Тема: ПЦР-амплификация с ДНК-зондами флуоресцентно меченными ДФ-520/560
-
Детская онкология -
Кардиоонкология -
Лечение онкологических заболеваний -
Онкогастроэнтерология -
Онконефрология -
Паллиативная медицина -
-
Акушерство и гинекология -
Анатомия -
Андрология -
Биология -
Болезни уха, горла и носа -
Валеология -
Ветеринария -
Внутренние болезни -
Военно-полевая медицина -
Восстановительная медицина -
Гастроэнтерология и гепатология -
Гематология -
Геронтология, гериатрия -
Гигиена и санэпидконтроль -
Дерматология -
Диетология -
Здравоохранение -
Иммунология и аллергология -
Интенсивная терапия, анестезиология и реанимация -
Инфекционные заболевания -
Информационные технологии в медицине -
История медицины -
Кардиология -
Клинические методы диагностики -
Кожные и венерические болезни -
Комплементарная медицина -
Лучевая диагностика, лучевая терапия -
Маммология -
Медицина катастроф -
Медицинская паразитология -
Медицинская этика -
Медицинские приборы -
Медицинское право -
Наследственные болезни -
Неврология и нейрохирургия -
Нефрология -
Онкология -
Организация системы здравоохранения -
Оториноларингология -
Офтальмология -
Патофизиология -
Педиатрия -
Приборы медицинского назначения -
Психиатрия -
Психология -
Пульмонология -
Стоматология -
Судебная медицина -
Токсикология -
Травматология -
Фармакология и фармацевтика -
Физиология -
Фтизиатрия -
Хирургия -
Эмбриология и гистология -
Эпидемиология -