Микроскопия в коротковолновой части видимого света.

При этом более доступном способе в качестве возбудителя люминесценции используют коротковолновую часть видимого спектра - сине-фиолетовые лучи. Наблюдения можно проводить не только в специальном люминесцентном микроскопе, но и с помощью обычного микроскопа, установив на пути лучей синий стеклянный или жидкий светофильтр.

Рис 1. Люминесцентный микроскоп МЛ-2

В люминесцентных микроскопах типов МЛ и «Люмам» источником лучей, возбуждающих люминесценцию, является ртутно-кварцевая лампа ДРШ-250. В зарубежных микроскопах часто используют лампы типа НВО-200 и др. Кроме того, применяют ксеноновые (отечественные — ДКсШ, зарубежные ХВО), кварцевые лампы накаливания с галогенным (йодным) циклом типа КГМ-9-75Я:9В, 75 Вт, КГМ-12-100: 12В, 100Вт.

Недостатком ртутно-кварцевых ламп сверхвысокого давления является потребность в специальных устройствах для их включения, а также то, что они входят в рабочий режим только после определенного времени после их включения. Ксеноновые лампы неудобны из-за сложной схемы включения.

Лампы с йодным циклом уступают ртутно-кварцевым и ксеноновым лампам по яркости, но отличаются простотой включения и стабильностью излучения.

В последнее время для этих целей стали применять оптические квантовые генераторы, например аргоновый ионный лазер, которые обеспечивают яркое монохроматическое излучение.

Микроскопы типа «Люмам» отличаются от МЛ-1 тем, что при работе в падающем и проходящем свете имеют два отдельных источника освещения (лампа ДРШ-250) и для фазово-контрастной микроскопии — лампа накаливания с йодным циклом (КГМ-12-100).

Для наблюдения люминесценции может быть использована микроскопия в проходящем свете (в светлом и темном поле), в падающем свете — лучи возбуждаются проходят через объектив микроскопа. Наиболее эффективным считается возбуждение люминесценции падающим светом.

Микроскоп МЛ-1 обладает двумя каналами прохождения возбуждающих лучей. Микроскопию ведут обычно в падающем свете. Нижний канал с фильтрами НС-10 и БС-8 можно использовать для фазово-контрастной и темнопольной микроскопии. В микроскоп МЛ-2 объект можно наблюдать при использовании верхнего канала освещения в варианте светлопольной и темнопольной микроскопии в падающем сине-фиолетовом свете и ближних лучей УФ-лучах; нижний канал применяют при обычной световой, темнопольной, фазово-контрастной микроскопии с подконденсорными фильтрами СС15, ОС11, НС2, НС3, НС10, 3С2.

Микроскопы МЛ-2а и МЛ-26 имеют комплекты для фотографирования объектов, МЛ-2в укомплектован насадкой ФМЭЛ-1. Микроскопы МЛД и МЛД-1 предназначены для микроскопии только в падающем свете, более компактны. Микроскопы серии «Люмам» отличаются наличием сменных светоделительных пластин: «Люмам-Р» — три пластины, у «Люмам-И» — четыре.

С целью выделения из общего светового потока спектрального участка, поглощаемого флуорохромом, перед препаратом с изучаемым объектом помещают «возбуждающие» фильтры, которые ставят между источником света и исследуемым объектом (УФС-3, ФС-1, СС14 и др.).

Из потока лучей, идущих от изучаемого объекта в окуляр, необходимо пропустить длинные волны, обнаруживаемые глазом и одновременно защитить глаз от жестких возбуждающих лучей.

При использовании источников излучения со сплошным спектром (ксеноновые лампы, лампы с йодным циклом) обычно применяют узкополосные и широкополосные интерференционные светофильтры, позволяющие эффективно выделять спектральную полосу, соответствующую максимуму поглощения флуорохрома.

Лучи, идущие от источника света, попадают на светоотделительную пластинку, находящуюся между окуляром и объективом, которая отражает возбуждающие лучи на исследуемый объект, длинноволновые лучи проходя через светоотделительную пластинку и поглощаются кожухом микроскопа. Возбуждающие лучи, попав на объект, трансформируются в длинноволновые лучи люминесценции, которые попадают в объектив, проходят через светоотделительную пластинку, запирающие фильтры и через окуляр идут в глаз наблюдателя. Часть возбуждающих лучей идет обратно в объектив без изменения, попадает на светоотделительную пластинку и отражается в сторону источника света. Подобное свойство светоделительной пластинки связано с тем, что она покрыта несколькими слоями диэлектриков и расположена под углом 45° по отношению к падающим на нее лучам. В микроскопах типа «Люмам» есть сменные светоделительные пластинки с разными параметрами возбуждающего спектра и спектра люминесценции, к которым подобраны соответствующие запирающие и возбуждающие фильтры.