Порядок работы с люминесцентным микроскопом

- Микроскоп устанавливают в затемненной части комнаты, заземляют. При настройке оптимального освещения зажигают ртутно-кварцевую лампу при помощи электропульта, дающего ток высокого напряжения и стабилизирующего рабочее напряжение лампы, снимают светофильтры и один объектив.

- В рабочее положение переводят пустое отверстие револьвера, открывают полевую и апертурную диафрагмы.

- На предметный столик кладут лист белой бумаги и при помощи центрировочных винтов добиваются правильного расположения ярко светящей части тела лампы.

- Закрывают полевую диафрагму и, перемещая коллектор, добиваются фокусировки электродов лампы на бумаге.

- В соответствии с видом наблюдаемой люминесценции подбирают и устанавливают возбуждающие и запирающие фильтры.

- Помещают на предметный столик объект, фокусируют изображение. Центрируют отверстие закрытой полевой диафрагмы, приоткрывая ее немного больше поля зрения используемого окуляра.

- Апертурную диафрагму прикрывают в зависимости от интенсивности флуоресценции фона до уровня, обеспечивающего наиболее контрастное изображение объекта. Необходимо следить, чтобы раствор сульфата или воды в кювете охлаждения были прозрачными. Для этого используют 2-5%-ный водный раствор сульфата меди или дистиллированную воду, а также фильтры С3С7, или С3С14, или же С3С24. Сочетание фильтров возбуждения излучения и запирающих светофильтров представлены в таблице 2.

Таблица 2

Параметры возбуждения и выделения люминесценции

Микроскопию бактериальных препаратов обычно проводят с объективом х90 и иммерсионным маслом. Используют специальное нефлуоресцирующее масло.

Для заключения люминесцирующих гистологических препаратов обычные среды такого рода непригодны, можно применять забуференный глицерин, поливиниловый спирт.

При флуорохромометрии изучаемый объект помещают в центр поля зрения, прикрывают диафрагмы до уровня, чтобы освещаемый участок был чуть более объекта, переключают ход лучей на ФЭУ, отмечают показания прибора, затем измеряют интенсивность свечения фона. Разность между показателями объекта и фона отражает интенсивность свечения объекта. Для этой цели можно использовать микроскопы МЛ-28, «Люмам-42», «Люмам-43».

Промышленность выпускает фотометрические насадки ФМЭП-1 и ФМЭП-1А (входят в комплект микроскопов МЛ-2Б и МЛ-4), позволяющие объективно и качественно оценивать интенсивность свечения объекта (цитофлуорометрия). Оптическая схема цитофлуорометра (однолучевого) сходна с таковой микрофотонасадки, но вместо фотопленки используется фотоэлектронный умножитель со светофильтрами для выделения спектрального максимума люминесценции.