Микроскопический метод исследования
Оплодотворение и культивирование эмбрионов проводилось в эмбриобоксе отделения вспомогательных репродуктивных технологий ФГБНУ НИИ АГиР им. Д.О.Отта на средах Origio (Дания) в условиях инкубатора PLANER (Origio, Дания) с конценрацией СО2 5%, и постоянной температрой 37°C.
Оценку показателей эякулята супруга (партнера), аспирированной фолликулярной жидкости яичников на предмет наличия ооцит-кумулюсных комплексов (ОКК), оплодотворения ооцитов, стадии развития и качества эмбрионов использовали микроскопический метод.
Анализ фолликулярной жидкости яичников. Фолликулярную жидкость аспирированная при ТВП под контролем микроскопа просматривали на предмет наличия ооцит-кумулюсных комплексов (ОКК).
Оценка оплодотворения. Оплодотворение половых клеток осуществляли двумя способами: ЭКО - путем инсеминации ооцитов спермой супруга/партнера, и ЭКО + ICSI с применением техники внутрицитоплазматической инъекции сперматозоида в яйцеклетку. Техника ICSI применялась при качественных и количественных нарушениях в показателях спермы, наличия высокого титра антиспермальных антител (MAR test более 50%).
При проведении оплодотворения методом ICSI оценивали зрелость ооцитов: ооциты на стадии метафазы II считали зрелыми (MII), метафазы I - незрелыми (MI). Через 18-20 ч после оплодотворения оценивали эффективность оплодотворения по наличию двупронуклеарных. Частоту оплодотворения вычисляли как отношение зигот с двумя пронуклеусами к общему количеству зигот. На стадии дробления качество эмбрионов оценивалось по наличию фрагментации цитоплазмы и количества и симметричности бластомеров [145].
Общее количество зигот с двумя пронуклеусами
Частота оплодотворения = х 100%
Общее количество ооцит—кумулюсных комплексов
Оценка развития эмбрионов in vitro. Оценка развития и качества эмбрионов производилась ежедневно. Эмбрионы на 3 сутки развития оценивали по A.
Van Steiterghem [147], степени фрагментации (объему эмбриона, занимаемому безъядерными фрагментами цитоплазмы), форме и относительным размерам бластомеров(от А до С, А-лучшее качество), рисунок 8. Осуществлялся перенос эмбрионов А и В класса с 6-8 бластомерами.
Рисунок 8 - Микрофотография эмбрионов разного качества на 3-й день развития (A. Van Steiterghem et al., 1995). Буквами обозначено изображение эмбрионов разного качества: А - тип А — эмбрион отличного качества без ануклеарных (безъядерных) фрагментов (4А); В - тип В — эмбрион хорошего качества с содержанием ануклеарных фрагментов до 20% (4В); С - тип С — эмбрион удовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов 21- 50% (4С); D - тип D — эмбрион неудовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов более 50% (4D).
Доля эмбрионов А — класса на 3-й день развития
Кол - во эмбрионов А - класса на 3-й день развития с 6-8 бластомерами = х 100%
Общее количество эмбрионов на 3 - день развития
3.5
Еще по теме Микроскопический метод исследования:
- 3.4 Данные микроскопического, микологического и бактериологического исследований
- Результаты электронно-микроскопического исследования
- Микроскопическое исследование на контаминацию грибами
- Микроскопическое исследование
- Учет результатов микроскопического исследования при световой микроскопии
- Телемедицинские установки для микроскопических исследований ВВ DiViSy РМ2000
- Техника микроскопического исследования мазка
- Микроскопическое исследование живых клеток бактерий
- Форма ответа ветеринарной лаборатории о результатах микроскопического, бактериологического, вирусологического, химико-токсикологического исследований
- Специальные методы исследования Биохимическое исследование
- Лабораторные и инструментальные методы исследования Клинические исследования.
- Методы исследования Клинические методы исследования
- Методы исследования
- Макро- и микроскопическая характеристика амилоидоэа
- Морфологические методы исследования