ОДНОМОМЕНТНАЯ, ОДНОПРОБИРОЧНАЯ ПРОБА НА ОСМОТИЧЕСКУЮ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ

При появлении подозрения на ГП необходимо провести скрининговое исследование при помощи одномоментной, однопробирочной пробы на осмотическую резистентность. Данная проба дает положительную реакцию в основном при талассемиях.

Ниже приводится методика и техника ее проведения:

Реактивы:

1. Основной 10% раствор с рН-7,4:

62

NaCl - 90 г.

Na2HPO4 -136,65 г,

NaH2P04xH202 -2,43 г.

Дистиллированная вода до 1000 мл.

2. Рабочий 0,35% раствор. Готовится разведением 35 мл основного 10% раствора в 1000 мл дистиллированной воды.

Ход определения: в меланжер для эритроцитов до метки 1 набирают кровь из пальца и до метки 101 -0,35% рабочий раствор. Меланжер осторожно встряхивают и оставляют на 20 минут.

Учет результатов однопробирочной пробы на ОРЭ: в норме в рабочем 0,35% растворе разрушается 90% эритроцитов, и раствор становится совершенно прозрачным. При талассемиях эритроциты осморезистентны и большая часть их в этом растворе не гемолизируется, поэтому раствор остается мутным, т.е. ОРЭ будет положительной.

Результаты оцениваются по степени мутности раствора в ампуле меланжера по трехбальной системе «-» реакция отрицательная; «+» реакция слабо положительная (сомнительная) и «++» реакция положительная. Ниже приводятся критерии для этих оценок.

"-" - раствор в ампуле меланжера совершенно прозрачный (через широкую часть ампулы меланжера можно свободно читать текст газеты - осмотическая резистентность нормальная).

"+" - раствор в ампуле мутный (даже крупный газетный текст читается с трудом - более 20-30% эритроцитов негемолизнрованно - проба сомнительна) "++" - раствор очень мутный (текст прочесть невозможно - осмотически устойчивых эритроцитов более 30% - проба положительна).

Одномоментная проба отражает повышение осмотической резистентности эритроцитов, что объясняется наличием в крови большого количества молодых клеток, в частности, ретикулоцитов. Эти молодые клетки проявляют большую устойчивость к лизису по мере понижения концентрации NaCl, вследствии чего эритроциты дольше сохраняются в растворе.

Данная проба проста, удобна и не требует много времени для выполнения. В то же время, наш большой опыт работы с ней свидетельствует о ее достаточной специфичности и чувствительности для ориентировочного выявления гемоглобинопатии, в частности и СКБ.

При положительной однопробирочной пробе и обнаружении в периферической крови мишеневидных и необратимо серповидных эритроцитов проводится метабисульфитная проба, выявляющая серповидные эритроциты.

63