Исследование антиоксидантных ферментов в эритроцитах и сыворотке крови
Определение активности супероксиддисмутазы проводилось в супернатанте гемолизата эритроцитов, приготовленного по модифицированному методу Nishikimi N. et al. [172]. В лизате эритроцитов определяли активность глутатионпероксидазы.
Забор венозной крови проводился натощак в утренние часы из локтевой вены пациента в количестве 8 мл в пробирку типа BD Vacutainer с этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТА) в качестве антикоагулянта.
, После осаждения форменных элементов, эритроцитарную массу отделяли от
плазмы крови центрифугированием при 1500 об/мин в течение 6 минут: дважды отмывали физиологическим раствором (0,9% раствором хлорида натрия), удаляя надосадочную жидкость. Эритроцитарный остаток переносили в пластиковую пробирку и хранили при -75°С. До измерения
> эритроцитарную массу размораживали на водяной бане при +37°С. Для
приготовления лизата крови в соотношении 1:10, к 500 мкл размороженных эритроцитов добавляли 4500 мют забуференной* воды (1 часть Na-Na- фосфатного буфера 0,05М pH 7,4 и 9 объемов дистиллированной воды). Для осаждения гемоглобина в полученном лизате крови к 2 мл лизата при
? постоянном интенсивном встряхивании впрыскивали 1600 мкл смеси
этанол:хлороформ (3:5), после чего выставляли на снег на 30 минут. Затем в пробирку впрыскивали 400 мкл холодной дистиллированной воды,
тщательно встряхивая, и ставили на снег. Через 10 минут полученную смесь центрифугировали при +4 °С на скорости 2000 об/мин в течение 10 минут. Прозрачную надосадочную жидкость - супернатант хранили во время измерения в снегу. В размороженных отмытых эритроцитах, до приготовления супернатанта, определяли содержание гемоглобина на автоматическом гематологическом анализаторе АВХ Micros 60 ОТ 8.
2.4.5.1.
Еще по теме Исследование антиоксидантных ферментов в эритроцитах и сыворотке крови:
- Определение общей антиоксидантной ёмкости сыворотки крови
- Глава 3. Исследование уровня окислительной модификации белков и молекул средней массы на модельной биологической системе желточных липопротеидов, продуктах пчеловодства каквеществах природного происхождения, обладающих антиоксидантным действием, и сыворотке крови экспериментальных животных (крысы)
- Исследование антител к БТШ в сыворотке крови
- Исследование уровня ПСА сыворотки крови
- Методы исследования содержания гормонов сыворотки крови
- Исследование уровня креатинина сыворотки крови
- Результаты биохимического исследования сыворотки крови у пациенток, перенесших гестоз
- Вирусологическое исследование на наличие антител в сыворотке крови
- Исследование антител к БТШ-70 в сыворотке крови больных ХГН
- 5.1. Исследование интенсивности хемилюминесценции, активности церулоплазмина и состояния мембран лимфоцитов и эритроцитов в крови больных раком молочной железы с различной эффективностью аутоплазмохимиотерапии
- Исследование интенсивности хемилюминесценции, активности церулоплазмина и состояния мембран лимфоцитов и эритроцитов в крови больных раком молочной железы при аутомиелохимиотерапии
- Глава 4. Разработка подходов комплексного использования модельной биологической системы желточных липопротеидов при одновременном добавлении продуктов пчеловодства как веществ природного происхождения, обладающих антиоксидантным действием, и сыворотки крови экспериментальных животных (крысы) при спонтанном и Бе2+-индуцированном окислении
- 4.2. Оценка системы перекисного окисления липидов эритроцитов и плазмы крови
- Сыворотка (плазма) крови.
- Содержание ВНСММ и олигопептидов в плазме и на эритроцитах крови воротной и нижней полой вен крыс в посттравматическом периоде ушиба сердца
- Содержание VEGF в сыворотке крови в основных группах.