3.2.7.2 Продукция супероксиданионов в тесте с нитросиним тетразолием
Метод автоматизированного учета теста с нитросиним тетразолием в спонтанной и индуцированной модификациях использовали для изучения способности макрофагов к продукции микробоцидных кислородзависимых радикалов.
Для оценки спонтанной продукции кислородных радикалов, 100 мкл клеточной суспензии резидентных макрофагов в концентрации 1х106кл/мл вносили в 96-луночные плоскодонные планшеты, затем добавляли культуральную среду RPMI-1640 с 25% содержанием ЭТС. Оценивали спонтанную и индуцированную продукцию кислородных радикалов макрофагами. Для определения индуцированного показателя НСТ-теста использовали ЛПС в дозе 1 мкг/мл, 0,1% суспензию зимозана и / или штаммы C. neoformans в концентрации 1х105 кл/мл. Краситель нитросиний тетразолий (НСТ, Sigma, США), приготовленный на забуференном физиологическом растворе (ЗФР), добавляли в объеме 50 мкл на лунку в конечной концентрации 1мкг/мл.
|
центрифугирования. После высушивания планшет на воздухе, образовавшийся в лунках диформазан растворяли путем добавления в каждую лунку 120 мкл 2М КОН (UNID, Корея) и 140 мкл ДМСО (GCC, США). Содержимое лунок суспендировали и содержание восстановленного красителя оценивали спектрофотометрически при длине волны 620 нм на аппарате EMS Reader MFV2. Результаты выражали в единицах оптической плотности (едОП) на 1х106 перитонеальных макрофагов [10, 104, 47].
Еще по теме 3.2.7.2 Продукция супероксиданионов в тесте с нитросиним тетразолием:
- Тест восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест)
- 3.2.7.1 Продукция нитроксид анионов
- 3.2.8 Определение уровня продукции цитокинов макрофагами
- 5. Обеспечение доступности высококачественной продукции
- 5.2.1 Влияние штаммов C. neoformans разной вирулентности на способность макрофагов к продукции супероксид анионов in vitro
- 9.3.5.1. Основные этапы процесса сертификации продукции
- 1.4. Перспективы отечественного движения за качество продукции
- Процессы жизненного цикла продукции (раздел 7 ГОСТ ISO 9001-2011)
- 3.4. Государственная гигиеническая регламентация и регистрация веществ, материалов, продуктов питания, промышленной продукции
- Гигиеническая экспертиза плодоовощной продукции