Определение параметров эндотоксемии

Оценку эндогенной интоксикации осуществляли путем определения целого пула метаболитов: веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) и олигопептидов (ОП). Содержание ВНСММ исследовали отдельно в плазме и на эритроцитах крови воротной вены (ВВ) и нижней полой вены (НПВ) по методике М.Я.

Согласно методике, крупномолекулярные белки плазмы крови и эритроцитов осаждали 15% раствором трихлоруксусной кислоты (ТХУ) и регистрировали спектральную характеристику водного раствора супернатанта в зоне длин волн от 238 до 298 нм. Регистрация спектра при 238-298 нм в зоне ультрафиолетовой части позволяет провести комплексную оценку токсичных продуктов и более 200 различных веществ, образующихся при нормальном и нарушенном метаболизме. Конечный результат содержания ВНСММ рассчитывали путем интегрального измерения площади фигуры, образованной осью абсцисс, и полученными значениями экстинкций для каждого типа определения плазмы и эритроцитов. На основании значений экстинкций строили спектрограммы.

Содержание олигопептидов определяли в слабокислом, разведенном в соотношении 1:9 супернатанте, полученном при осаждении белков плазмы 15% ТХУ. Для определения использовали реактивы: Фолина-Чокалтеу, щелочномедный реактив, раствор альбумина (0,25 мг/мл).

Ход определения. Из разведенного в 10 раз супернатанта брали по 1 мл и прибавляли 2 мл щелочно-медного реактива, оставляли раствор при комнатной температуре на 10 мин. Добавляли 0,2 мл реактива Фолина-Чокалтеу, перемешивали и через 30-40 мин измеряли величину оптической плотности на спектрофотометре при длине волны 750 нм. Окончательный расчет результатов осуществляли по графику после построения калибровочной кривой. Для построения калибровочной кривой брали 6 химических пробирок, помещали в них по 0,04; 0,08; 0,16; 0,24; 0,32 и 0,4 раствора альбумина и доводили дистиллированной водой до 0,4 мл. Концентрации белка в пробах были равны: 0,025; 0,05; 0,1; 0,15; 0,25 мг/мл соответственно. Дальнейшую обработку вели так же, как и обработку исследуемых образцов. Полученные величины оптической плотности откладывали по оси ординат, а концентрации белка - по оси абсцисс.

Содержание молекул средней массы в гомогенатах тонкой кишки и печени определяли в супернатанте, полученном при осаждении белков 10% раствором ТХУ, центрифугированном на 3000g в течение 30 минут и разведенном дистиллированной водой в соотношении 1:10, на длине волны 254 нм.

Исследования выполнены с использованием центрифуги Элекон ЦЛМН-Р 10-01, спектрофотометра СФ-46. В лаборатории кафедры патологической физиологии с курсом клинической патофизиологии Омской государственной медицинской академии (зав. кафедрой - засл. деятель науки РФ, профессор В.Т. Долгих).

2.6