Методы патоморфологического анализа

Автор выражает глубокую признательность Самусенко Игорю Алексеевичу и Мужикяну Арману Артушовичу за помощь в анализе гистологических препаратов.

2.14.1. Микроскопическое исследование ткани лимфатических узлов

При оценке выраженности патологических изменений на модели острого шейного лимфаденита у лабораторных животных была проведена гистологическая оценка пораженных лимфатических узлов.

С этой целью после эвтаназии интактный и пораженный лимфатические узлы извлекали, фиксировали не менее 24 ч в 10% нейтральном забуференном формалине. После стандартной гистологической проводки через спирты возрастающей концентрации (70-95%) и пропитывания в хлороформе ткань заливали в парафин. С парафиновых блоков делали срезы толщиной 4-6 мкм, окрашивали гематоксилином и эозином для выявления типовых патологических процессов и изучения необходимых параметров при помощи светооптического микроскопа Leica DM LS при увеличении микроскопа 200 и 400.

Микрофотографирование проводили при помощи цифровой фотокамеры Leica DC320.

Для оценки специфической фармакологической активности препаратов проводили сравнительную гистологическую и морфометрическую оценку их влияния на стимуляцию макрофагов, гистиоцитов и В-лимфоцитов пораженных и интактных (контрлатеральных) лимфатических узлов шеи у крыс. Для этого была оценена:

Структура лимфатических узлов;

Диаметр герминативных центров вторичных фолликулов;

Гистиоцитоз синусов - содержание гистиоцитов и макрофагов в синусах по периметру лимфатического узла - полуколичественно:

0 баллов - отсутствие;

1 балл - до 1/3 периметра синусов;

2 балла - от 1/3 до 2/3 периметра синусов;

3 балла - более 2/3 периметра синусов;

4 балла - весь периметр синуса.

2.14.2. Микроскопическое исследование носовых ходов

С целью оценки выраженности патологических изменений при моделировании острого риносинусита было произведено морфологическое исследование слизистой оболочки и подслизистого слоя обоих носовых ходов (дыхательная и обонятельная область) экспериментальных животных.

После окончания клинической фазы эксперимента материал от животных фиксировали в течение 24 часов в 10 % растворе формалина, далее в течение 3-х суток декальцинировали в 12% смеси де Кастро, после чего, материал проходил стандартную обработку в спиртах нарастающей концентрации (70-95%), ксилоле и парафине для изготовления гистологических препаратов с толщиной серийных парафиновых срезов 3-5 мкм.

Изучение необходимых параметров проводилось при помощи светооптического микроскопа Leica DM LS при увеличении микроскопа 200.

Микрофотографирование проводили при помощи цифровой фотокамеры Leica DC320.

Сопоставление и гистологическую оценку изменений проводили в сравнении с группой интактных крыс.

С целью выявления степени патологических изменений при гистологическом, гистохимическом и морфометрическом исследовании полуколичественным методом были оценены основные патологические процессы, характерные для острого риносинусита: в слизистой оболочке - полнокровие, гиперплазия и некроз эпителия, количество бокаловидных клеток на протяжении 1 мм слизистой носовой перегородки, характер воспаления и степень выраженности инфильтрации мононуклеарами (лимфоциты, плазматические клетки и гистиоциты) и лейкоцитами. В подслизистом слое - характер и степень выраженности инфильтрации мононуклеарами (лимфоциты, плазматические клетки и гистиоциты) и лейкоцитами, реакция слизи желез. Степень выраженности воспаления оценивалась полуколичественно:

0 баллов - отсутствие ифильтрации;

1 балл - слабо выраженная степень инфильтрации;

2 балла - умеренно выраженная степень инфильтрации;

3 балла - выраженная степень инфильтрации.

2.15.