СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Материалы и методы исследования

В соответствии с поставленными целями и задачами исследования проведено комплексное обследование 158 больных (88 мальчиков и 70 девочек) с верифицированным диагнозом МВ в возрасте от 6 месяцев до 18 лет (средний возраст 6,7±1,3 г.), которые составили основную группу.

В качестве контрольной группы было обследовано 68 условно здоровых детей в возрасте от 3 до 17 лет, которым был выполнен идентичный набор иммунологического обследования. Взятие образцов крови проводилось в соответствии с текущей версией Хельсинской Декларации, при условии отсутствия необходимости дополнительных заборов крови или амбулаторных посещений клиники.

Контрольная группа для проведения генетических исследований составлена из 91 здорового русского жителя г. Томска. От всех индивидов было получено информированное согласие на участие в медико-эпидемиологическом исследовании.

Согласно дизайну исследования, больные были сгруппированы с учетом степени тяжести заболевания. Первую группу составили 90 (57,0%) детей с тяжелой формой заболевания, вторую - 59 (37,4%) пациентов со среднетяжелым течением, третью – 9 (5,7%) больных с легкой степенью недуга.

Учитывая, что характер микробной инфекции в бронхиальном дереве у больных муковисцидозом во многом обусловливает специфичность воспалительного процесса, и особенности течения основного заболевания мы разделили больных на группы с учетом микробиологического статуса. Первую группу составили пациенты, у которых доминирующим микробным агентом в бронхиальном дереве являлась Pseudomonas aeruginosa - 72 ребенка (45,6%).У пациентов второй группы выявлена колонизация респираторного тракта Burkholderia cepacia - 39 детей (24,7%).

Исследования проводились на основе собственных наблюдений и данных медицинской документации (клиническая история болезни, заключение специалистов по параклиническим методам обследования). Корме того, нами была разработана детализированная анкета-опросник, которая отражала состояние здоровья ребенка с момента рождения, развитие и течение заболевания.

Все дети основной группы обследованы в соответствии со стандартами высокотехнологичной медицинской помощи Минздравсоцразвития России для больных муковисцидозом.

Кроме того, мы использовали дополнительное иммунологическое обследование, включающее определение содержание компонентов комплемента (С3, С4 и С5а, фактора В), ИЛ-1β, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, показатели интерферонового статуса (ИФН-γ и ИФН-α) в сыворотке крови и в мокроте. Исследование проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью коммерческих иммуноферментных наборов ООО “Цитокин” (С-Петербург) и «ВСМ Diagnostics» (США). Лизоцимная активность сыворотки крови и слюны, бактерицидная активность сыворотки крови определяли нефелометрическим методом.

Генетическое обследование включало генотипирование полиморфных маркеров гена CFTR и генов-модификаторов иммунного ответа: ИФН-γ, ИЛ-4, ИЛ-4Rа. Анализ генетических полиморфизмов осуществляли с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), используя структуру праймеров и параметры температурных циклов, с последующим анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ).

Генетическое обследование проводили на базе НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН, г.Томска совместно с профессором, д.м.н. Кондратьевой Е.В. и доцентом Янкиной Г.Н.

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием параметрической и непараметрической статистики в зависимости от шкал и характера распределения переменных. Расчет критериев проводился с использованием пакета «Statistica 6.0».