Тест лимфоцитолиза

C целью диагностики криза отторжения при кератопластике нами разработан тест лимфоцитолиза.

Известно, что решающую роль в формировании реакции трансплантационного иммунитета при пересадке тканей и органов играют лимфоидные клетки.

Была поставлена задача изучить возможность выявления сенсибилизированных лимфоцитов при контакте in vitro со специфическими антигенами, используя тест в качестве критерия начала иммунологических реакций в ответ на антигены трансплантата.

Как показано ранее, введение гетерологичной антилимфоцитарной сыворотки у кроликов в зону трансплантации роговицы по поводу химических ожогов глаз наряду с угнетением трансплантационного иммунитета вызывало сенсибилизацию лимфоцитов к сывороточным антигенам того вида, от которого получена антисыворотка. При этом сенсибилизированные лимфоциты выявлялись іп vitro при их контакте с соответствующим антигеном и комплементом.

Ha основании полученных фактов изучали процесс сенсибилизации лимфоцитов как к чужеродным, сывороточным, так и к аллогенным трансплантационным антигенам.

Взвесь лимфоцдных клеток получали из периферической гепаринизированной крови путем осаждения лейкоцитов в желатине, последующего пропускания через колонку с фильтром и обработки дистиллированной водой для окончательного очищения лимфоцитов от полинуклеаров.

Количественное определение сенсибилизированных лимфоидных клеток проводили 2 методами:

1) путем окрашивания трипановым синим взвеси лимфоидных клеток после инкубации их в течение 1 ч при 37°С в присутствии комплемента и специфического антигена;

2) путем определения степени лизиса сенсибилизированных лимфоцитов (лимфоцитолиз) после инкубации при вышеуказанных условиях. Степень лизиса (лимфоцитолиз) определяли путем подсчета количества клеток в камере Горяева до инкубации и после нее в опыте и контроле.

Сенсибилизированные лимфоциты к специфическому антигену выявляли у подопытных животных на 3, 5, 7, 14, 21, 28, 35, 45, 60 и 90-е сутки после кератопластики. B качестве антигена использовали экстракт донорской роговицы.

K 0.1 мл лимфоидных клеток (концентрация 6xl06 мл), полученных из крови подопытных и контрольных животных, добавляли 0.1 мл соответствующего антигена и 0.1 мл комплемента и инкубировали при 37°С в течение 1 ч. Подсчитывали процент лимфоцитолиза и количество мертвых (окрашенных) клеток в опыте и контроле.