ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНСЕКТИЦИДНЫХ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТОВ

Инсектицидное действие препаратов проверяют обычно на различных видах насекомых: мухах, постельных клопах, блохах, вшах и др. (в первую очередь на тех видах, против которых предназначается использовать пре­парат).

Для большей достоверности можно рекомендовать проводить испы­тания инсектицидов на однородном бноматериале, т. е. на насекомых опре-

деленного возраста, пола, упитанности и т. и. Биологический материал не всегда бывает возможным достать в природных условиях и его получают в лаборатории (инсектарии), создавая возможно близкие к природным условия.

Для испытания инсектицидов в опыт берут по 10 и 20 вшей, комаров, мух, москитов, блох, 5—10 экземпляров клопов, тараканов и т. д. и опре­деляют минимальную концентрацию препаратов и экспозицию воздействия их на членистоногих, в результате которых наступает 50- 100% гибель.

Гибель насекомых зависит от свойств препарата, от вида насекомого, фазы его развития, упитанности, пола, температурных условий, наличия резистентности (специфической) и др. Так, например, вши и блохи погибают от одних и тех же препаратов быстрее, чем клопы и тараканы; голодные членистоногие более чувствительны к инсектицидам, чем сытые; лабора­торные штаммы более чувствительны к инсектицидам, чем членистоногие, выловленные из естественных мест их обитания, особенно там, где в течение ряда лет использовались одни и те же инсектициды, и т. п.

Таким образом, экспозиция воздействия инсектицида зависит от видо­вых, биологических и экологических особенностей членистоногого и колеб­лется в значительных пределах — от нескольких секунд до многих часов. Так, например, время контакта с дустом ДДТ для вшей бывает достаточным 3—5 минут, а для клопов — 15—30 минут.

Каждую серию опытов сопровождают контролем. Для контроля исполь­зуют членистоногих одного и того же вида, пола и возраста, что и в опыте, в размере не менее 10—20 особей.

Весь период наблюдения членистоногих содержат при благоприятных для них условиях существования.

Все опыты проводят одновременно в двух — трех повторностях. В жур­нале отмечают количество насекомых и состояние их: время возбуждения, нарушения координации движения и т. и.

Инсектицидные свойства препарата определяют по количеству пара­лизованных и погибших насекомых с учетом расхода активно действующего вещества препарата (АДВ) и экспозиции его воздействия.

Препарат считают непригодным для борьбы с тем или иным видом членистоногих, если необходимая экспозиция его воздействия превышает 24 часа. После окончания экспозиции состояние членистоногих проверяют через различные сроки, начиная с 1 минуты до 1—7 суток [Методы иссле­дования дезинфекционных, дезинсекционных и дератизационных препа­ратов, М, 1962; (Е. А. Погодина, 1954; Д. К. Шапиро, 1950)∣.

Испытание инсектицидных свойств дустов и порошков. Применяют методы максимального и минимального воздействия на членистоногих. В первом случае насекомых (клопов, тараканов, блох) помещают в про­бирки или стаканы, содержащие 50—100 мг препарата, и встряхивают до пол­ного обволакивания их порошком, после чего за ними ведут наблюдения 1—2 суток и более.

В опытах со вшами порошок равномерно рассыпают по дну чашки Петри или чайного стакана из расчета 0,05—0,1 мг активно действующего вещества на 1 см® поверхности, после чего помещают на них насекомых и ставят в термостат при 28^uдля дальнейших наблюдений в течение 24— 48 часов.

По другому способу дустом или порошком покрывают дно стакана или чашки Петри. Избыток дуста удаляют перевертыванием и постукива­нием пальцем по дну сосуда, после чего на нем остается минимальное коли­чество препарата; вслед за этим в сосуд помещают насекомых и ведут за ними

наблюдение в течение 1—2 суток за вшами и 5—7 суток за клопами, тара­канами и другими членистоногими.

Испытание инсектицидных свойств жидких препаратов. Раствор ι^,,~~ эмульсию препарата наливают в стаканчик, бюкс или другую лаборат : - ную посуду.

Взрослых насекомых, личинок и яйца помещают в марлевые салфетки (5x5 см) и погружают в раствор или эмульсию испытуемого препарата. Экспозиция может колебаться в пределах от нескольких секунд до 1 часа. После этого насекомых обсушивают на фильтровальной бумаге и переносят в чистую посуду на кусочки фильтровальной бумаги или материи для даль­нейших наблюдений.

Препарат считают эффективным, если насекомые после пятиминутного пребывания в испытуемой жидкости погибают в 100% через 24 часа.

При проведении опытов с растворами дезинсекционных средств яйца насекомых также погружают в растворитель без препарата. Через 24—48 часов проверяют количество живых насекомых, бывших в опыте, и сравнивают с количеством живых насекомых в контроле.

Для того чтобы насекомые (клопы, тараканы) не выползали из стаканов, края последних смазывают вазелином.

При испытании инсектицидных свойств растворов на мухах препарат определенной концентрации, согласно предполагаемой норме расхода АДВ на 1 и², наносят на лист фильтровальной бумаги, который после просушки разрезают на полосы и вкладывают в широкие химические про­бирки, вплотную приглаживая их стеклянными палочками к ее стенкам. Ширина полосы должна быть немного меньше внутренней поверхности пробирки для того, чтобы оставалось узкое пространство на ее стенке (щель), не покрытое бумагой, для наблюдения за поведением мух внутри пробирки при экспозиции 1—5 минут.

Для определения инсектицидных свойств используют также большие химические стаканы, банки или энтомологические садки (15 ? 15 ? 15 см). В этом случае стенки их обрабатывают определенным количеством инсек­тицидного раствора. После просушки и продувания воздухом в целях удаления паров растворителя туда впускают определенное количество мух (10—20 по счету) и в случае длительных экспозиций в садки ставят чашки Петри с ржаным хлебом, смоченным молоком, раствором сахара или глюкозы для питания мух, а в стаканы — кусочки мокрого хлеба. Одновременно с определением инсектицидных свойств изучаемого препарата проверяют, не обладает ли такими же свойствами и растворитель, на котором он изго товлен.

Контрольные опыты проводят в аналогичных условиях, с той лишь разницей, что стенки стаканов, банок и энтомологических садков не обраба­тывают препаратом, а в пробирки кладут полоски чистой (необработанно, >бумаги.

Как в опыте, так и в контроле, парализованных, мертвых и живых мух учитывают через 15 и 30 минут и 1; 3; 24 часа, после чего вычисляют процент погибших.

При определении инсектицидных свойств жидких препаратов в отно­шении блох невысокопрыгающие виды (например, Xenopsilla cheopis) помещают в обыкновенные стаканы, а высокопрьтгающие — в высокие стеклянные цилиндры или банки. На стенки или на дно их равномерно наносят установленное количество препарата; можно пропитывать также кружки фильтровальной бумаги и класть их на дно стаканов. Допускается пропитанную препаратом бумагу помещать на дно эмалированного таза, 30 Заказ № 228

на которую ставят цилиндр и впускают в него определенное количество блох (экспозиция контакта блох с препаратом составляет от 2 до 60 минут).

Больший процент погибших насекомых под влиянием препарата ука­зывает на большую относительную эффективность его. Если препарат содержит растворитель, последний испытывают в чистом виде наряду с пре­паратом.

Испытание инсектицидных свойств тканей, пропитанных (импрегни- рованных) препаратами. Указанный метод испытания применяется глав­ным образом в работе со вшами. На кусочки ткани (бязь) размером 6—7 см пипеткой наносят по 1 мл раствора испытуемых инсектицидов различной концентрации (примерно 0,1—1%). Пропитанные образцы высушивают при комнатной температуре, разрезают полосками и кладут на дно проби­рок или стаканчиков; туда же одновременно помещают насекомых. Для контроля в пробирки помещают такие же кусочки материи, не пропитанные инсектицидом. Пробирки со вшами ставят в термостат при температуре 28—30° и относительной влажности 70%. Результаты опытов учитывают, как обычно, через 24—48 часов.

Кроме указанной экспозиции, инсектицидные свойства тканей испы­тывают также при более коротком контакте (от 10; 20; 30; 60 минут до 2; 4; 6 часов).

Во всех этих случаях после истечения срока экспозиции насекомых снимают с импрегнированного образца и переносят на чистую ткань, а затем наблюдают и отмечают время появления паралича и гибели через 1; 3; 6; 12; 24 или 48 часов; после этого высчитывают процент парализованных и погибших вшей.

Путем подкормки устанавливают время, когда насекомое теряет спо­собность питаться после пребывания их на импрегнированной ткани при тех или иных экспозициях.. При учете через 24 часа подсчитывают и коли­чество отложенных ими гнид, а в дальнейшем изучают процент их выпла- живаемости.

Поскольку для практических целей важно выяснить вопрос о действии пропитанной ткани на гнид, последнюю импрегннруют определенной кон­центрацией инсектицида, подсаживают на нее сытых половозрелых вшей, которых после откладки яиц удаляют, а ткань с отложенными на ней яйцами помещают в термостат при температуре 30°. Кроме того, ставят чашку Петри с водой для создания влажности, необходимой для развития гнид После этого наблюдают за выплаживанпем из яиц личинок.

Испытание инсектицидных свойств поверхностей, импрегнированных препаратами. На стекло, бумагу, деревянную, оштукатуренную или покры­тую масляной краской дощечку (размером 10X10 или 10x20 см) наносят пипеткой или из пульверизатора определенное количество испытуемого раствора инсектицида и просушивают в течение 18—24 часов, после чего на них подсаживают насекомых на срок от 5 минут до 24 часов. Клопов и блох прикрывают стаканчиками или стеклянными цилиндрами диаметром 3—4 см и высотой 5—6 см, а мух и тараканов контактируют с помощью экспозиметра. Последний представляет собой стеклянную, открытуюс обеих сторон трубку длиной 10—15 см и диаметром 2—6 см с двигающимся внутри них поршнем (см. рис. 94). При подсадке насекомых на поверхности поршень в трубке отодвигают к верхнему концу и пускают внутрь 5—10 экземпляров насекомых, которых затем с помощью поршня прижимают к обработанной поверхности. После окончания экспозиции поршень снова отодвигают, подводят под трубку лист бумаги и переносят насекомых в чистую посуду для дальнейших наблюдений.

Рис.

В связи с тем что препараты ДДТ и ГХЦГ и др. при нанесении на поверх­ность сохраняют длительное время свои инсектицидные свойства, произво­дят периодическое определение эффективности обработанных поверхностей. Для этого пользуются также экспозиметром или бумажками. В первомслучае мух заставляют в течение оп­ределенного времени контактировать с обработанными поверхностями, пос­ле чего ведут наблюдение до их гибе­ли. Второй метод заключается в том, что обработанную поверхность проти­рают бумажками, которые затем пе­реносят в пробирки и подсаживают туда нужное количество мух. После контакта в течение определенного вре­мени мух переносят в чистую посуду с кормом и наблюдают за ними 24 ча­са. Для каждой экспозиции исполь­зуют отдельную пробирку. Эффектив­ность определяют по разнице гибели насекомых в опыте и в контроле.

Испытание токсичности препара­тов в приманках, привлекающих мух (кишечных инсектицидов). В настоя­щее время для уничтожения мух в ме­стах содержания животных и в местах их выплода применяют приманки с инсектицидами из группы фосфор­органических соединений.

Определение максимальной ток­сической концентрации приманки производят в садках размером 20 X X 20 X 20 см, стенки которых состоят из металлической сетки с величиной ячеек 1,5 X 1,5 мм. В каждый садок помещают 20 самок мух и ставят чаш­ки Петри с бумажным фильтром, ув­лажненным водой. Через 8 часов сверху на садок кладут листок фильтро­вальной бумаги размером 10X10 см, смоченный 2 мл приманки, содержа­щей определенное количество препарата. Мухи через ячейки сетки питаются этой приманкой; через 8 часов приманку убирают, а внутри садка ставят хлеб, смоченный в молоке.

Подсчет погибших мух проводят через 1 час после того, как мухам была дана приманка, затем в момент снятия приманки и через 24 часа.

Для установления токсической дозы приманки листы бумаги пропи­тывают различными количествами препарата (от 0,1 до 2%). Каждый опыт ставят в 2—-3 повторностях.

Опыты сопровождают контролем, в котором таким же методом кормят мух приманкой, не содержащей препарат.

При определении наиболее привлекательной приманки для мух, содер­жащей пли не содержащей инсектицид, пользуются боксом различной емкости, но не менее 0, 1 M³.

В приготовленную приманку окунают фильтровальную бумагу размером 5x5 см и кладут ее в чашку Петри, которую ставят в угол бокса. Сразу

может быть испытано четыре приманки, содержащие и не содержащие инсектицид, т. е. в каждый угол бокса ставят по чашке Петри с при­манкой.

В бокс впускают по 150—200 мух и через каждые IO минут ведут под­счет мух, севших на чашки и на стенки над чашками на площади размером 10x10 см. Опыты ставят как с сытыми, так и с голодными мухами. После каждого подсчета мух сгоняют с места движением бумажки внутри бокса, а чашки меняют местами. Время опыта 30—40 минут.

Определение ларвицидных свойств препаратов. При определении инсек­тицидного действия препаратов, пригодных для борьбы с мухами, испы­тание последних проводится не только на взрослых мухах, но и на личин­ках. Опыты ставят на личинках Ill возраста, отличающихся наиболее крупной величиной и особым строением дыхалец (Штакельберг). В широ­ко гордые стеклянные (консервные) банки емкостью 500 мл или в обычные чайные стаканы кладут 100 г конского навоза или отрубей, смоченных водой (на 100 г отрубей 200 мл воды).

Жидкие препараты измеряют в кубических сантиметрах, причем в слу­чае испытания малых доз заранее с помощью бюретки устанавливают коли­чество капель в 1 мл, а затем по количеству взятых капель исчисляют дозу в кубических сантиметрах. При изучении порошковидных препаратов берут определенную навеску. При обобщении материалов дозировки жидких и порошковидных препаратов выражают в граммах чистого препарата без учета примесей или растворителей.

В банку вводят определенную дозу сухого или жидкого инсектицида и тщательно перемешивают с субстратом, после чего туда помещают 25— 30 личинок. Каждый опыт повторяют 3 раза. Одновременно ставят и кон­трольный опыт без применения ларвицидов для определения жизнеспо­собности личинок. Банки, стаканы закрывают чашками Петри или стек­лянными пластинками или шелковыми ситами и оставляют при комнатной температуре. Через 24—48 часов из банок субстрат выкладывают на тарел­ки. фотографические кюветы или другую посуду и выбирают взятых в опыт и контроль личинок; наиболее целесообразно субстрат заливать насыщен­ным раствором поваренной соли, при помешивании которого личинки всплывают на поверхность. По разнице в количестве погибших личинок в опыте и контроле определяют эффективность препарата. Живых личи­нок, а также личинок, сомнительных в отношении их жизнеспособности, помещают в чистый субстрат без примеси инсектицида для дальнейших наблюдений. Личинок, превратившихся в куколок за период опыта, считают живыми. По прошествии 3 или 5 дней вновь проводят осмотр личинок, определяют жизнеспособность их и вычисляют окончательный процент их гибели в результате воздействия примененного инсектицида.

При углубленном изучении инсектицидных свойств препарата опыты проводят на личинках всех возрастов, куколках и яичках мух. Эффектив­ность препарата на личинках и куколках (экспозиция 24—48 часов) опре­деляется количеством вылетевших из них мух.

Испытание фумигационного действия препаратов. При определении фу.мигационного свойства фильтровальную бумагу пропитывают раствором инсектицида из расчета 1—2 г активного вещества на 1 м². Если при ука­занных концентрациях будет наблюдаться 100% гибель насекомых, кон­центрацию снижают до получения аналогичных результатов при меньших дозах препарата. После высушивания примерно в течение 24 часов бумагой, содержащей инсектицид, обертывают внутри широкогорлую стеклянную банку. Затем в банку подвешивают энтомологический садок из металлнче-

ской сетки с таким расчетом, чтобы он находился на расстоянии 3 см от сте­нок банки. В садки помещают 10—15 мух на время от 1 до 24 часов, поме­щают также и корм. Во время опыта банки оставляют открытыми или неплот­но прикрытыми стеклянными или деревянными пластинками. Опыты сопро­вождают контролем, в котором банки обертывают фильтровальной бумагой, пропитанной только нейтральным растворителем. Учет гибели мух произ­водят через 15, 30 минут, 1; 3; 6; 12 и 24 часа. Фумигационное действие жидких инсектицидов (фумигантов) определяют в банках или колбах, нанося препарат на бумагу или вату, помещенную на дно сосуда.

Определение акарицидных свойств препаратов. На деревянные или фанерные пластинки или на поверхность стекла размером 10x20 см нано­сят изучаемый препарат из расчета от 0,5 до 2 г АДВ на 1 м²и кладут их на лист фильтровальной или простой белой бумаги, края которой смазаны вазелином. Затем на пластинки помещают 5—10 взрослых клещей (иксо- довых, аргасовых и др.) или. их нимф и личинок и наблюдают в течение необходимого времени (от нескольких минут до 24—48 часов). При коротких экспозициях клещей, сползающих с обработанной пластинки, сажают обратно с помощью увлажненной тонкой кисточки или энтомологического пинцета. При длительных экспозициях клещей на поверхности обрабо­танных пластинок стеклянную пластинку сверху накрывают чашкой Петри или другим стеклянным сосудом, внутреннюю поверхность которых обра­батывают теми же дозами изучаемых препаратов.

Испытание акарицидных свойств порошков и дустов производят по ме­тоду максимального и минимального воздействия (см. выше).

При испытании акарицидных свойств эмульсий и растворов может быть использован также метод погружения клещей в жидкие препараты тех или иных концентраций.

При использовании этого метода клещей с помощью пинцета или мар­левых салфеток погружают в раствор пли эмульсию на время от 1—2 секунд до 60 минут.

По окончании намеченной экспозиции клещей переносят в пробирки, на дно которых кладут слабоувлажненные опилки, прикрытые кусочком фильтровальной бумаги и хранят при комнатной температуре.

Результаты регистрируют через сутки, двое и т. д. до 45 дней.

Клещи, находящиеся в различных физиологических состояниях, про­являют неодинаковую устойчивость к воздействию препаратов. Так, напри­мер, сытые клещи устойчивее, чем голодные, и т. д.

Контроль эффективности дезинсекции в камерах. Для контроля работы камер используют тест-инсекты—хлопчатобумажные мешочки (4?5 см) со вшами и гнидами. Эти мешочки с насекомыми помещают в Другие мешочки большого размера (15—10 см), куда одновременно закладывают максималь­ные термометры; после этого мешочки завязывают. Последние затем закла­дывают в семь комплектов верхней одежды — по три в каждый комплект, в места, намеченные для контроля, и развешивают в центре камеры, в четы­рех углах и у дверей, выходящих на чистую и грязную половины. Один комплект с тестами не подвергается обработке и служит контролем. Места размещения тестов и термометров фиксируют в протоколе и наносят на схе­му. После загрузки камеры вещами по норме проводят обычную обработку их согласно инструкции для той или иной камеры с отметкой температур по наружному термометру и специальным термометрам (если они исполь­зуются). По окончании контрольной работы отмечают показания макси­мальных термометров, а тесты вместе с контрольными направляют в лабо­раторию для немедленного исследования. При отсутствии лаборатории

тест-инсекты исследуют на месте. После опыта вши не должны проявлять никаких признаков жизнедеятельности, они легко отделяются от ткани, иногда приобретают темную окраску или становятся хрупкими. Вшей, не проявляющих жизнедеятельности, следует оставлять на сутки в пробирках при комнатной температуре для проверки их возможного оживления. Гнид после опыта помещают в термостат и наблюдают за выпла- живанием.

Определение специфической устойчивости у мух к инсектицидам. Опре­деление наличия или отсутствия у мух специфической устойчивости к хло­рированным углеводородам имеет большое практическое значение.

Для определения устойчивости комнатных мух вылавливают в поме­щениях не менее чем в трех местах населенного пункта (столовых, магази­нах, общежитиях), которые обычно подвергают обработке хлорированными углеводородами и где отмечена низкая эффективность этих обработок. В качестве контроля параллельно с мухами из населенного пункта, где подозревают устойчивость, определяют устойчивость у мух из населенного пункта, где инсектициды этой группы никогда не применялись или не при­менялись последние 2—3 года. Выловленных мух до опыта в течение суток содержат в садках с марлевыми стенками и снабжают кормом — сахарным сиропом.

В опытах по определению степени устойчивости мух к инсектицидам используют ацетоновые или спиртовые растворы ДДТ или ГХЦГ в раз­личных концентрациях.

Опыты следует проводить в апреле — мае на мухах первой генерации Для определения наличия устойчивости, переданной по наследству, в летние месяцы (июль — август) и осенью (сентябрь — октябрь) — для определе­ния устойчивости, приобретенной в течение летних месяцев. При постановке опытов необходимо учитывать сезонные колебания степени устойчивости и вес мух.

Опыты ставят при температуре 24—25°; после опыта мух содержат в течение суток при этой же температуре. В каждом опыте используют 15—20 самок; число повторных опытов — 6—10. Через сутки после опыта производят подсчет мух, оставшихся в живых и погибших.

Можно определять ЛД-50^[XXVII] путем нанесения инсектицидов на поверх­ность тела насекомых двумя методами: методом нанесения яда с помощью петли или с помощью микропипетки.

В первом случае в стаканчик емкостью 3 мл наливают 1 мл изучаемого препарата с таким расчетом, чтобы последний имел в стаканчике высоту 1 см. Раствор инсектицида наносят на насекомое при помощи петли, кото­рую готовят из тонкой трансформаторной проволоки (0,2 мм) путем нама­тывания се на иглу (диаметром 2 мм). Окружность петли загибают под прямым углом к своему стержню. Такая петля при погружении на 1 см в 1% раствор инсектицида удерживает на себе около 5 у препарата (1 у равен 0,001 мг). При уменьшении концентрации препарата в растворе или увеличении числа петель, наносимых на насекомых, уменьшают или увеличивают количество микрогамм на одну, особь.

После каждого нанесения инсектицида петлей последнюю погружают в чистый спирт или ацетон, налитый в такой же стаканчик, для обмыва­ния и просушивают на фильтровальной бумаге. При проведении опытов стаканчик с раствором прикрывают указательным пальцем левой руки и после взятия 40—50 капель раствор в стаканчике меняют.

При нанесении препарата на мух последних лучше слегка наркоти­зировать эфиром или газообразной углекислотой, применяя ее так, чтобы наркоз у всех насекомых быстро проходил; инсектицид можно нано­сить на них также и без предварительной анестезии. При этом насекомых осторожно берут двумя пальцами за лапки при выползании их из пробирки и подают для нанесения инсектицида, после чего выпускают в чистые садки или стаканы с пищей и наблюдают в течение 24 часов при комнатной температуре.

Все опыты сопровождаются контролем, в котором на насекомых наносят таким же способом растворитель.

Для определения количества препарата в одной петле спиртовой или ацетоновый раствор препарата определенной концентрации очень слабо подкрашивают эозином. Затем берут 0,5 мл испытуемого раствора в конус­ный стаканчик или градуированную пробирку емкостью 1—2 мл и петлей наносят капли этого раствора на чистый лист фильтровальной бумаги до тех пор, пока весь раствор из стаканчика будет перенесен на бумагу; опыт повторяют не менее 3 раз. Пересчитав количество петель, нанесенных на бумагу, и зная процентное содержание препарата в растворе, определяют количество гамм препарата в одной петле. Количество инсектицида, захва­тываемого петлей, может быть определено химическим методом, для чего препарат, нанесенный на бумагу, таким же образом экстрагируют при помощи органического растворителя.

При нанесении препаратов на насекомых с помощью микропипетки испытуемый раствор набирают в градуированную микропипетку емкостью 0,1 мл с делениями 0,01 мл, укрепленную на штативе строго в горизонтальном положении (носок пипетки оттягивают до 2см длины, ровно отрезают и хорошо отшлифовывают).

Подопытных насекомых со спинной стороны осторожно прикладывают к концу микропипеткии извлекают из нее 1 рл испытуемого раствора вслед­ствие силы сцепления жидкости с поверхностью тела насекомого.

Отмечая помещение мениска раствора в пипетке, можно наносить на покровы насекомых точные дозы препарата.

После этого подопытных насекомых переносят в садки или стаканы с пищей и водой и ведут за ними наблюдение.

Лабораторные методы испытания препаратов, обладающих свойствами отпугивать кровососущих членистоногих. При первичном лабораторном отборе отпугивающих веществ (репеллентов) против кровососущих насе­комых в качестве биологической модели используют крысиную блоху Xenopsylla clιeopis, культивируемую в лабораторных условиях. Допол­нительно можно использовать также некоторые лабораторные культуры комаров; Culex pipiens molestus, Aedes aegyρti и Anopheles maculi- pennis.

Первичный отбор репеллентов на крысиной блохе. Обычно для этих целей применяют 10-литровые широкогорлые банки, в которых имеется до 400—500 блох на субстрате — опилки и овес (в одной банке можно ста­вить несколько опытов с различными репеллентами). Испытуемые препа­раты в виде 20% спиртовых или ацетоновых растворов в количестве 0,5— 20 мл на 1 м² наносят на кусочки хлопчатобумажной бязи размером 5 X ?10 см, просушивают в течение суток при комнатной температуре и подве­шивают на проволочные крючки, впаянные к концам стеклянных палочек длиной 30—35 см. Затем последними делают круговые движения внутри банки по поверхности субстрата в течение 25 секунд (примерно один круг за 5 секунд), после чего палочки с материей поднимают на высоту 15—

20 см, чтобы блохи могли только спрыгивать, не нападая вновь, и спустя 30 секунд ведут подсчет оставшихся на материи блох.

Опыт сопровождается контролем, в котором используют такие же кусочки ткани, но без препарата. Все опыты проводят в одних и тех же условиях при температуре 18—22“, в 10 повторностях.

Коэффициент защитного действия репеллента (КЗД) определяют по . (Л—В)-100 . ,

формуле: ........... ........... , где А —число блох, вспрыгнувших на контроль­

ный образец; В —число блох, вспрыгнувших на обработанный образец (суммарно по 10 повторностям). Результаты считают удовлетворительными, если КЗД равен примерно 70%.

Для определения продолжительности действия репеллентов на тканях последние испытывают на 5; 10; 15; 20-й и т. д. день после их обработки.

Первичный отбор репеллентов на комарах. Дня отбора репеллентов против кровососущих комаров в лабораторных условиях используют лабораторных животных, например самок белых мышей. Опыты проводят в садках размером 20?20?20см, обтянутых тюлем или марлей (для удобства наблюдений одну сторону садка делают из стекла), при температуре воздуха 20—22 . В каждый садок берут не менее 100 комаров в возрасте не ниже 15—20 дней. Испытуемые препараты в количестве 0,15 мг наносят перед началом опыта на поверхность цилиндра длиной 9 см и диаметром 2,5 см из металлической сетки с размером ячейки 1,5 мм. Верх цилиндра закры­вают металлической сеткой, низ — корковой пробкой. Внутрь цилиндра сажают белую мышь и помещают его в садок с комарами. Такой же цилиндр с мышью, но ничем необработанный, служит контролем. Наблюдения за пове­дением комаров (наличие или отсутствие возбуждения, число посадок, их длительность и число попыток к укусам) проводят в начале опыта, а затем через каждые 1—1¹₂часа до тех пор, пока не наступит разницы в поведении контрольных и подопытных комаров.

Эталоном при испытании репеллентов для комаров служит диэтил- тйлу амид.

Опыты с каждым препаратом повторяют не менее 3 раз.

Первичный отбор отпугивающих препаратов на иксодовых клещах. Приведенные ниже методы первичного отбора репеллентов, защищающих от нападения на человека клещей, разработаны на клещах вида Ixodes persulcatus. Однако они могут быть применимы и к другим видам иксо­довых клещей с таким же характером поведения.

Полоски хлопчатобумажной белой бязи размером 30x5 см, предвари­тельно расчерченные на квадратные сантиметры, пропитывают спиртовыми или ацетоновыми растворами испытуемых препаратов из расчета 40 мл на 1 м². После просушивания полоски ткани прикрепляют под углом около 70° к специальному станку из алюминия (Л. И. Жукова, 1959). В качестве контроля прикрепляют такие же полоски ткани, пропитанные только растворителем без препарата.

На каждую полоску ткани подсаживают снизу активных клещей по одному на полоску, которые под влиянием отрицательного геотаксиса ползут снизу вверх. По секундомеру отмечают время нахождения клещей на контрольной и на обработанной полосках ткани до достижения ими верхней части полосок или до их отпадения, а также зарисовывают и изме­ряют длину пройденного ими пути на полосках тканей, пользуясь отра­жением их через стекло, установленное на этом же станке. Для каждого опыта используют 10 голодных самок Ixodes persulcatus, каждую из которых троекратно сажают на обработанную полоску.

C целью упрощения описанного выше метода полоски ткани (35?5 см>или фильтровальной бумаги (25?2 см) пропитывают испытуемым веществом до половины полоски только с верхнего конца, оставляя нижнюю часть необработанной. Подсаженные снизу клещи, передвигаясь вверх, встречают барьер из репеллента. В зависимости от того, поворачивает ли клеш обратно, не доползая до репеллентного препарата, или же приходит в непосред­ственный контакт с ним, можно сделать заключение о характере действия репеллента (Ю. А. Елизаров, 1961).

Методы первичных испытаний репеллентов в полевых условиях

Отпугивающие свойства препаратов, давших хорошие результаты в лабораторных опытах, проверяют затем на людях в условиях, прибли­жающихся к практике. Такую проверку проводят в помещении или в при­родных условиях.

Испытания репеллентов на блохах. Для испытания используют шаро­вары из белой хлопчатобумажной бязи с концами, зашитыми в виде чулок (расход бязи на шаровары 2—2,5 м). Опытные шаровары замачивают в 25% ацетоновом или спиртовом растворе испытуемого препарата в количестве 320 мл (40 мл препарата на 1 м²) и высушивают их, не отжимая, при ком­натной температуре в течение суток (контрольные шаровары замачивают таким же количеством растворителя без препарата).

В помещении или на затененной площадке размером 3 M²расстилают белую клеенку. Края клеенки зашивают таким образом, чтобы образовался борт высотой 30 см, и закрепляют их с помощью колышек. Затем на поверх­ность клеенки насыпают тонкий слой опилок или земли (до 1 см) и выпу­скают 800—1000 блох.

Два человека — один в опытных, другой в контрольных шароварах одновременно входят на площадку и двигаются по ней один за другим в течение 3 минут, отмечая количество блох, достигших колен и пояса.

После этого экспериментаторы выходят с опытной площадки и спустя одну минуту собирают и подсчитывают количество блох, оставшихся на не­обработанных и обработанных шароварах.

Опыты организуют не менее 3 раз, причем каждый раз наблюдения повторяют также не менее чем в 3 повторностях. Коэффициент отпуги­вающего действия определяют по приведенной выше формуле (см. Лабора­торные испытания).

В связи с тем что часть блох спрыгивают с клеенки, а часть травми­руется, попадая под ноги экспериментаторов, количество блох как на опыт­ной площадке, так и вспрыгивающих на шаровары резко снижается от повторности к повторности. Если при подсчете на контрольных шароварах окажется меньше 100 насекомых, на площадку дополнительно выпускают 200—300 блох.

Блох, собранных с шаровар, высыпают обратно на опытную площадку.

Испытания репеллентов на комарах. Первичные полевые испытания проводят в местах массового нападения комаров. Репелленты испытываются непосредственно на коже испытателя или на сетке — дель. При каждом испытании участвуют одновременно 3 человека, все части тела которых, за исключением предплечья, защищены от уколов комаров плотной одеж­дой, обувью, мустикером и перчатками.

При испытании репеллентов путем накожного применения один из участ­ников служит контролем для проверки интенсивности нападения комаров на незащищенный участок предплечья (площадь 350 см²). У второго испы-

тателя такой же участок предплечья покрывают 0,5 мл испытуемого пре­парата в жидкой форме (или 0,5 г в виде крема, мази); предплечье третьего испытателя покрывают таким же количеством диметилфталата, служащего эталоном. Активность нападения комаров определяют частотой уколов в 1 минуту⁷. Если препарат защищает в течение часа и более, то определение активности нападения комаров производят не реже одного раза в каждые 30 минут.

Показаниями длительности защитного действия репеллента служат: а) абсолютное защитное время, т. е. время от нанесения препарата до пер­вого укола, подтвержденного в течение 15 минут вторым уколом, и б) отно­сительное защитное время, т. е. время после второго укола, подтвержденного в течение 3 минут не менее чем одним или несколькими уколами в 1 минуту. Основным критерием оценки репеллентности будет являться отношение абсолютного и относительного защитного времени испытуемого препара­та к абсолютному и относительному защитному времени диметилфта лата.

После троекратного наблюдения препараты удаляют с кожи посред­ством ватных тампонов, смоченных этиловым спиртом.

В течение опыта необходимо производить измерение температуры и влажности воздуха и скорости ветра.

Испытание репеллентов на сетке (дель) производят так же, как испы­тание репеллентов при накожном применении, с той лишь разницей, что кож}' предплечий испытателей не смачивают препаратом, а покрывают сеткой размером 350 см², смоченной 0,7 мл испытуемого препарата или диметилфталата, растворенными в этиловом спирте иди в ацетоне. Крите­рием окончательного действия репеллентов служат количества уколов комаров через сетку.

Так как длительность действия репеллентов на сетке может быть дольше, чем на коже, их испытывают через каждые 5 дней до окончания их дей­ствия. Оценку репеллента при этом методе производят также по длитель­ности абсолютного и защитного времени в днях и по отношению последних к таковым для диэтилтолуамида.

Полевые испытания репеллентов на иксодовых клещах. Первичные полевые испытания против клещей Ixodes persulcatus проводят в местах с высокой нх численностью (не менее 10—15 клещей, снятых с человека на протяжении 1 км пути).

При испытании противоклещевых репеллентов последние наносят в виде ацетоновых растворов на поверхность комбинезонов в количестве 600—800 мл на комбинезон (из расчета 40 мл испытуемого вещества на 1 м²). Смачивание комбинезонов производят в резиновых перчатках и респира­торах.

Одновременно в испытании участвуют не менее 4 человек, из которых 3 надевают комбинезоны, пропитанные репеллентами, и один — чистый комбинезон, взятый в качестве контрольного. Испытатель, одетый в чистый комбинезон, поочередно с каждым испытателем в обработанных комбине­зонах проходит по участку леса 50—200 шагов на расстоянии 3—5 м друг от друга. Через определенные промежутки времени (от 1 до 5 минут), что зависит от численности клещей, испытатели останавливаются для взаимоосмотра с целью выявления напавших на них клещей. Клещей, снятых с обработанных комбинезонов, собирают в пробирки и наблюдают в течение 5 дней с целью выявления акарицидного действия препарата. В качестве контроля служат клещи, собранные с необработанного ком­бинезона.

Опыты проводят через каждые 3 дня. Коэффициент защитного действия (КЗД) препарата вычисляют по формуле, описанной выше в разделе по отбо­ру репеллентов на крысиной блохе.