3.2. Методики цитологического исследования

Мы располагаем многолетним опытом, позволяющим решать в плановых и экстренных ситуациях лечебно-диагностические проблемы поражений трахеи. Разработаны теоретические и практические основы обеспечения высокорезультативной срочной цитологической диагностики основных органических поражений трахеи, проводимой в условиях рентгеноэндоскопического исследования [Астраханцев Ф.А., Нечаева Т.И., 1978].

Использование методики срочного цитологического исследования, как самостоятельного метода диагностики в комплексной технологической программе рентгеноэндоскопического исследования, позволяет управлять качеством оказания помощи, что в свою очередь позволяет получать в подавляющем большинстве случаев достоверный нозологический диагноз и тем самым повышать эффективность рентгеноэндоскопического исследования.

Рентгеноэндоскопическая методика является комплексной. Она основана на программно-целевом подходе и прямо подводит к диагнозу болезни. Она включает в себя 3 программы. Первая представляется выявляющей: с помощью рентгенографии, томографии и рентгеноскопии обнаруживают в трахее патологические изменения, оценивают их объем, анализируют рентгенологическую симптоматику. Вторая программа (определяющая) предназначена для уточнения мофологической природы патологического образования. Третья программа - уточняющая. В ходе ее выполнения с помощью специальных рентегнологических методов получают данные об особенностях развития и распространения патологических изменений в трахеи. Две последние программы интегрированы и выполняются совместно под местным или внутривенным обезболиванием.

Во время осуществления определяющей программы из очага поражения берут материал для морфологического исследования. Биопсию производят непосредственно из трахеи. Для нее применяют разнообразные катетеры, щетки, щипцы, фрезы, иглы и другие инструменты.

Цитологический контроль за степенью информативности материала не должен удлинять время рентгеноэндоскопического исследования. Целью срочной цитологии является оперативная оценка результатов биопсии и предоставление информации, позволяющей эффективно управлять программой рентгеноэндоскопического исследования для получения окончательного развернутого диагноза болезни.

В нашем институте разработана методика срочной окраски цитологических препаратов. Она заключается в использовании в качестве фиксатора краски Лейшмана в метаноле, после чего препараты докрашиваются смесью 0,1%-ных растворов азура и эозина, приготовленных на буферных растворах, с различными pH: N1 - pH-6,0, N2 pH-7,6. Готовится они из смеси солей: калия фосфорнокислого однозамещенного и натрия фосфорнокислого двузамещенного.

Промывка препаратов производится в буферной смеси со смешанной pH, которая еще больше подчеркивает видимость отдельных клеточных элементов в зависимости от их принадлежности. При разработке метода удалось сократить время окраски препаратов до 60-90 секунд, но не в ущерб качеству окраски клеточных элементов, этого важного фактора, обеспечивающего высокоэффетивную цитологическую диагностику. Сравнительная характеристика выявляемости некоторых диагностических структур при плановом и срочном цитологическом исследовании представлена в табл. 5.

Таблица 5. Сравнительная характеристика выявляемости диагностических структур при окраске по Паппенгейму и экспресс-методом ( на примере плосколеточного рака).

Из таблицы видно, что при сравнительной оценки препаратов, обработанных методом Паппенгейма (азур-эозиновая смесь на дистиллярованной воде) и экспресс-методом, разница в окрашивании различных клеточных структур незначительна. В отличии от плановой окраски по Паппенгейму, при окраске экспресс-методом ядра выглядят более светлыми, но структура хроматина видна хорошо.

Цитоплазма клеток тоже окрашивается в более светлые тона и не имеет выраженной базофилии, нередко сливаясь с фоном препарата. Иногда мы не видим межклеточных мостиков в сохранившихся комплексах. Но все остальные структурные, клеточные и функциональные признаки: форма клеток, их величина, клеточный и ядерный полиморфизм, наличие или отсутствие ядрышек в ядрах просматриваются при экспресс-окраске хорошо и ничем не отличаются от тех же признаков при окраске методом Паппенгейма. Поэтому дифференцированная обработка препарата после его фиксации и предварительной обработки краской Лейшмана позволяет эффективно выявлять клеточные структуры, а последующая промывка в буферных растворах со смешанным pH еще больше подчеркивает видимость отдельных клеточных структур.

При исследовании препаратов, полученных во время эндоскопии, придерживаются следующих правил:

1) после обнаружения элементов опухоли в первых просмотренных мазках всегда просматривают все последующие доставленные в лабораторию препараты;

2) при отрицательных или сомнительных результатах цитологического исследования все препараты должны быть просмотрены вторично;

3) при отрицательных или сомнительных результатах исследования материала из трахеи и неясном клинико-рентгено-эндоскопическом диагнозе необходимо тщательно исследовать мокроту, выделенную больным непосредственно после диагностической процедуры и повторно на 2-4 дни.

При отсутствии положительных данных эксфолиативной цитологии обычно прибегают к пункционной биопсии патологического очага тонкой иглой. Извлеченный материал распределяют тонким слоем на предметном стекле. Цитологическое заключение обычно дают через 30-40 минут, а в срочных случаях (асфиксия) - через четверть часа с момента получения материала, что обычно совпадает с окончанием комплексного бронхологического исследования.

Хорошее взаимопонимание между рентгено-бронхологом и цитологом помогает в решении диагностических трудностей и нередко дает возможность избежать тактических ошибок в разработке плана лечения.

Результаты цитологического исследования обычно оформляют в трех вариантах:

1) подтверждение нозологического диагноза в соответствии с современной классификацией ВОЗ и с указанием степени дифференцировки опухоли;

2) при отсутствии в препаратах элементов опухоли, но при наличии признаков других заболеваний (туберкулез, воспаление) также дается соответствующее заключение;

3) при обнаружении атипичных элементов, которые нельзя отнести к опухолевым, но подозрительных в смысле принадлежности к онкологии, из-за трудности трактовки цитологической картины, недостаточного количества материала (одиночные необычные клетки) или деформация клеточных элементов, описывают только обнаруженную картину без окончательного заключения.