Приготовление красителей

Наиболее широко при простом (однократном) способе окраски мазков применяются водный фуксин Пфейффера, метиленовый синий Леффлера и генцианвиолет.

Водный фуксин готовится из концентрированного фенолового фуксина Циля (основной фуксин - 1 г; спирт 96%-ный - 10 мл; фенол кристаллический - 5 г; глицерин - несколько капель; вода дестиллированная - 100 мл), разводя его дестилли- рованной водой в соотношении 1:10.

Метиленовый синий Леффлера готовят путем прибавления к 30 мл насыщенного раствора метиленового синего (10 г метиленового синего в 100 мл 96%-ного этилового спирта) 1 мл 1%-ного натрия гидроксида или калия гидроксида и 100 мл де- стиллированной воды; везувин - растворяя 2 г порошка в смеси 60 мл 96%-ного спирта и 40 мл дистиллированной воды при нагревании до кипения, с последующей фильтрацией.

Для приготовления генцианвиолета берут 1 г красителя и растворяют его в феноловом растворе - 100 мл дестиллированной воды, 2 г кристаллического фенола и 10 мл 96%-ного этанола.

После окрашивания красители сливают, препарат промывают во дой и высушивают между листами фильтровальной бумаги. На сухой мазок наносят каплю масла и микроскопиру- ют с использованием иммерсионного объектива оптического микроскопа.

При сложных методах окраски мазков применяют два-три различных по цвету красителя, что позволяет дифференцировать протистов и выявлять некоторые нюансы в деталях их строения. К таким методам относят окраску по Цилю - Нель- сену, Романовскому - Гимзе и некоторые другие.

Мазок для люминесцентной микроскопии готовят обычным образом, фиксируют в ацетоне 5-10 мин и наносят на него флюорохром на 20-30 мин.

Для электронной микроскопии вместо предметных стекол применяются очень тонкие пленки-подложки, незначительно поглощающие электроны. Они крепятся на опорные сетки. Материалом для приготовления пленок служит коллодий, оксид алюминия и кварц. Исследуемый материал, тщательно очищенный от различных примесей, наносят на пленку, на которой после испарения жидкости остается тончайший слой. Высушенный препарат устанавливают для микроскопирования. Контрастирование препаратов осуществляется с помощью электроноплотных (задерживающих электроны) веществ: напыление тяжелыми металлами, обработка препаратов фосфорно-вольфрамовой кислотой и уранилацетатом.

Чистые культуры патогенных протистов выделяют на элективных средах, куриных эмбрионах, культурах человеческих клеток, а Trypanosoma kruzi культивируют в организме «поцелуйных клопов» путем вскармливания их на больных, но эту работу осуществляет хорошо обученный контингент сотрудников специализированных лабораторий и научно-исследовательских институтов.