МЕТОДИКА ВЗЯТИЯ КРОВИ И ПРИГОТОВЛЕНИЕ МАЗКА И ТОЛСТОЙ КАПЛИ

При обследовании на малярию значительного числа лиц необходимо заблаговременно подготовить иглы, предметные стекла, стекла со шлифованными краями, спирт, эфир, гигроскопическую вату.

Кровь обычно берут из мякоти последней фаланги безымянного или среднего пальца левой руки. Прокол производят острыми иглами одноразового пользования. Место укола протирают спиртом, а затем ваткой, смоченной эфиром для быстрого обсушивания. Если кровь из ранки от прокола выступает плохо,

Рис. 2. Правильно изготовленный мазок крови (по Г. В. Эпштейну, 1940).

то слегка массируют палец в направлении к месту укола или просят обследуемого посгибать пальцы и сделать несколько энергичных сгибательных движений кистью. Иногда производят повторный прокол. Когда от одного больного берут несколько мазков, а выступившая из пальца кровь свертывается, ее удаляют сухой ватой. При изготовлении мазков палец повертывают проколом вверх. K выступившей капле крови прикасаются нижней поверхностью предметного стекла, отступив на 1,5—2 см от узкого края. Затем стекло перевертывают, берут в левую руку, а в правую — предметное стекло со шлифованными краями и обломанными уголками и его узким краем под углом в 45° касаются капли крови. Кровь растекается по краю шли

Рис. 1. Изготовление мазка крови.

фованного стекла, после чего быстрым движением этого стекла вперед делают мазок (рис. 1, 2). Последний должен быть тонким (эритроциты не должны налегать друг на друга) и располагаться по средней части стекла, не доходя до боковых краев и до конца стекла, так как пораженные эритроциты в значительной части группируются у конца и по краям мазков.

При изготовлении толстых капель палец поворачивают проколом вниз. K выступающим каплям крови подносят предметное стекло, на которое берут 2—3 капликрови и затемиглой или углом другого предметного стекла кровь размазывают, чтобы получить на стекле овал диаметром около 1 см или полосу длиной 2—3 см. Слой крови не должен быть слишком толстым, так как в последнем случае при высыхании он превращается в корочку и легко отстает от стекла. После изготовления толстых капель их высушивают, помещая стекла на горизонтальную поверхность. Для ускорения высыхания стекол их можно помещать в термостат (30—35°). Нужно предохранять стекла от запыления, а также от мух и тараканов, которые охотно поедают влажную и подсохшую кровь.

Фиксация и окраска мазков крови. Мазки, высушенные на воздухе, фиксируют, а затем окрашивают. Для фиксации применяют метиловый спирт (фиксация 3—5 мин), этиловый 96° спирт (15 мин) или смесь Никифорова — абсолютный этиловый спирт и эфир в равных соотношениях (20 мин). Фиксатор можно наливать прямо на стекло, находящееся в горизонтальном положении, или лучше пользоваться специальными стаканчиками, в которые погружают сразу несколько препаратов. Фиксированные мазки высушивают на воздухе и окрашивают по методу Романовского — Гимза.

Готовый раствор краски разводят перед употреблением дистиллированной водой из расчета 1—2 капли на 1 мл воды и пипеткой наливают на мазки, помещенные на дно стеклянной ванночки. Продолжительность окрашивания — 30—45 мин. После окраски препарат промывают слабой струей воды и высушивают на воздухе. Ha стекле с мазком можно написать простым карандашом фамилию больного, номер и дату. Эта надпись хорошо сохраняется.

Дистиллированная вода для разведения краски должна иметь нейтральную или слабощелочнуюреакцию (pH = 7,0—7,2). Число капель основного раствора на определенный объем воды и продолжительность окрашивания лучше устанавливать для каждой отдельной серии краски Романовского путем предварительных проб.

Окраска толстой капли. Толстые капли после высушивания на воздухе окрашиваются краской Романовского — Гимза без предварительной фиксации. Техника окрашивания такая же, как при окраске мазка. Длительность окрашивания — около 40—45 мин. При этом происходит выщелачивание гемоглобина из эритроцитов, и одновременно окрашиваются лейкоциты, кровяные пластинки и плазмодии. Если толстые капли сохраняли неокрашенными более недели, то их следует предварительно обработать дистиллированной водой в течение 10—15 мин, наливая воду непосредственно на препарат. После удаления со стекол дистиллированной воды, вместе с выщелоченным гемоглобином, на них наливают красящий раствор. После окраски толстой капли препараты ополаскивают водой. Лучше всего промывать препарат погружением его в баночку с водой, соблюдая осторожность, чтобы не смыть со стекла окрашенную каплю.

Хранят окрашенные препараты завернутыми в бумагу, небольшими пачками, а лучше — в специальных папках с гнездами для каждого препарата. После микроскопирования иммерсионное масло удаляют мягкой фланелевой тряпочкой. Предварительно масло можно растворять очищенным бензином. Для большей сохранности можно делать защитные покрытия препаратов раствором органического стекла в хлороформе.

Для выявления плазмодиев мазки крови рассматривают под микроскопом с объективом 90 и окуляром 7, при достаточно ярком освещении дневным или искусственным светом, отраженным плоским зеркалом микроскопа. Диафрагму открывают полностью, и осветитель поднимают до уровня столика микроскопа. Каплю иммерсионного масла наносят на тонкое место мазка. После обнаружения в препарате эритроцитов регулируют высоту осветителя и положение зеркала.

B мазке крови плазмодии обнаруживаются в эритроцитах (рис.З), причем цитоплазма паразитов окрашивается в голубой или серовато-синий цвет, а ядро — в различные оттенки красного цвета. B цитоплазме плазмодия на стадии собственно ши- зонта появляется пигмент — мелкие зернышки коричневого или темно-коричневого цвета.

Стадия кольца. Форма кольца образуется через 2—3 ч после внедрения в эритроцит плазмодия (мерозоита). B меро- зоите образуется вакуоль, которая отодвигает цитоплазму и ядро на периферию и паразит принимает кольцеобразную форму с узким ободком голубой цитоплазмы без пигмента и рубиново-красным ядром.

Стадия собственно шизонта. Постепенно происходит увеличение цитоплазмы, в ней появляются зернышки пигмента и плазмодий вступает в стадию собственно шизонта. Различают малые, средние и крупные шизонты.

Стадия делящегося шизонта. Ha этой стадии происходит последовательное деление ядра на 2—4—8 частей до предельного числа, свойственного каждому виду плазмодиев. Затем паразит распадается на соответствующее число мерозоитов. Последние представляют собой комочки цитоплазмы размером около 1,5 мкм, содержащие ядро. Некоторая часть мерозоитов после внедрения в эритроциты развивается в незрелые половые клетки — гаметоциты, или гамонты, в цитоплазме которых также откладывается пигмент. Они служат источником заражения комаров рода Anopheles. B организме комаров гаметоциты совершают свое дальнейшее развитие. Различают мужские и женские гаметоциты, или микрогаметоциты и макрогамето- циты. Они имеют (за исключением P. falciparum) округлую форму и напоминают крупные шизонты. У P. falciparum гаметоциты имеют форму полулуний. Для определения вида малярийных плазмодиев необходимо знать их морфологические особенности в мазках и толстых каплях.