КУЛЬТИВИРОВАНИЕ КЛЕЩЕЙ

При культивировании клеЩей в лаборатории приходится решать, как хранить культуры и кормить голодных клещей. Иксо- довые клещи, как уже отмечалось ранее, довольно чувствительны к недостатку влаги, поэтому их содержание в лаборатории должно быть организовано с учетом этой особенности.

Чаще всего для содержания лабораторных культур иксодо- вых клещей применяются пробирки, в которых поддерживается постоянно высокая влажность за счет испарения налитой в них жидкости (об устройстве этих пробирок-гигростатов говорилось выше). Для предупреждения гибели клещей от плесени или микроорганизмов, находящихся во влажной среде, полезно пробирки, подготовленные для содержания клещей, автоклавировать (в актоклаве пробирки должны занимать вертикальное положение). Иногда и самих клещей (особенно виды, подверженные повреждению плесенью) перед помещением в пробирки промывают в 2—3% растворе фунгицида (например, напитавшихся самок клещей I. ricinus, I. persulcatus).

B термостате пробирки с клещами хранятся в наклонном положении в специальных штативах. Периодически культуры необходимо осматривать и пробирки, сильно загрязненные фекалиями клещей и переувлажненные изнутри, заменять на чистые. Температура в термостатах, где хранятся клещи, устанавливается в зависимости от целей культивирования и видов клещей. Если перед исследователем стоит цель получить как можно больше материала, ускорить развитие клещей, температуру поддерживают на уровне 28—30°. Хранение диапаузирую- щих клещей (отказывающихся от кровососания, приостановивших свое развитие) требует температуры в пределах 3—5°. Следует иметь в виду, что при содержании в холодильнике необходимо защитить клещей от высыхания, так как конденсация влаги на испарителе способствует быстрому падению относительной влажности в пробирках. Виды клещей, собранные в засушливых районах, не следует помещать в условия с 90—100% относительной влажностью, тогда как виды, обитающие в северных лесных районах, чувствительны к недостатку влаги.

Большой помехой при необходимости круглогодичного культивирования иксодовых клещей является переход их в состояние диапаузы. B некоторых случаях их удается вывести из этого состбяния, помещая на 2—3 суток в испарительную камеру холодильника, где температура держится от 7 до 10°ниже нуля. Опасаться вредного воздействия на клещей такой процедуры не следует, так как большинство видов иксодовых клещей (взрослые) не погибает даже при —20°.

Выбор животного — прокормителя клещей в процессе их лабораторного культивирования — зависит от стадии развития, вида клещей и, главным образом, от целей и возможностей экспериментатора. Нередко первое кормлениена животном клещей, собранных в природе, служит одновременно и постановкой биопробы с целью выделения штамма возбудителя от этих клещей. B этом случае предпочтение оказывают видам животных, чувствительным к возбудителю, которым предположительно заражены собранные клещи. Если исследователю необходимо выяснить пищевое предпочтение того или иного вида клещей, той или инойфазы их развития, то подбирают виды животных, подлежащих испытанию в этом отношениц. рбычно же само

Рис. 111. Размеры рукава для наклейки на кролика (в мм).

по ,себе культивирование иксодовых клещей ведут с использозанием доступных для исследователя животных, на которых клещи культивируемых видов охотно питаются. Наиболее выгодным и удобным следует считать кормление, иксодовых клещей на кроликах под «на- клейкой»..Перед тем, как подсаживать клещей, у кролика на спинеудаля- ется шерсть .c помощью изогнутых медицинских ножниц. После стрижки (она должна быть тща- тельной, .без повреждения

кожи) иногда остатки шерсти выбривают безопасной бритвой. Это облегчает наклейку на кожу кролика рукава, но, с другой стороны, часто приводит к механическому повреждению и последующему нагноению кожи (что сильно затрудняет кормление клещей на больном кролике).

Ha выстриженном участке кожи размером не менее 12 см в длину и 8—9 см в ширину наклеивают рукав, сшитый из плотной, тонкой белой материи (мадаполам, маркизет, бязь).

Поверх наклейки на кролика надевается «попона», изготовленная из прочной, но не очень толстой ткани (например, из льняного полотна или «бортовки»). Попона необходима для защиты наклейки и клещей от повреждения кроликом. Размеры и покрой попоны показаны на рис. 112; в зависимости от величины кролика размеры эти могут изменяться. Надетая на кролика попона зашивается спереди и сзади через край суровой питкой с таким расчетом, чтобы кролик не был ею сильно затянут и не мог бы из нее вылезти. Место на спине, где наклеен рукав, остается не- зашитым. Следует обязательно убедиться в том, что нижний задний край попоны не затрудняет кролику дефекацию и мочеиспускание. B противном случае попона намокает от мочи, под ней скапливаются фекалии и кролик может быстро погибнуть от резкого воспаления и некроза кожи живота и промежности- На шею кролику надевают фанерный «воротник»

Рие. 112. Покрой и размеры «попоны» для кролика, на котором кормят клещей (в мм).

Рис. ПЗ. Размеры «воротника» для ^ролика, на котором кормят клещей.

(рис. 113).Ha подготовленного таким образом кролика выса- живаютклещей. Они высыпаются в рукав на спину животного, после чего рукав дважды перевязывают суровой ниткой, скла- дывают и над ним зашивают попону. Ha следующий день кролика нужно осмотреть, проверить состояние попоны и наклейки и убедиться в том, что последняя плотно держится на коже животного. Одновременно на одного кролика можно поместить для питания несколько тысяч личинок, вышедших изодной яйцекладки, 100—200 нимф или 40—50 взрослых иксодовых клещей (крупные клещи Hyalomma помещаются в меньшем количестве, чем, например, клещи Rhipicephalus).

Если через несколько дней после высадки клещей на кролика наклейка от- станет.ее подклеивают тем же клеем. Прикрепившихся к коже клещей такая процедура обычно не беспокоит, а не прикрепившихся можно извлечь из-под наклейки, так кЗк они едва ли будут питаться в последующем.

Животных, с находящимися на них клещами, помещают в индивидуальные клетки и содержат, как обычно.Наслучай повреждения кроликом наклейки и расползания клещей сле^ дует предусмотреть возможность их локализации. Для этого группу клеток с кроликами или каждую клетку в отдельности ставят в металлические противни с бортами 8—10 см, куда наливают воду, а поверх воды — соляровое масло. Клетка, где находился кролик, с которого расползлись клещи, обрабатывается паром, кипятком или ра.створом инсектицида. B последнем случае клетка после необходимой экспозиции должна быть тщательно вымыта и высушена. Описанный способ кормления иксодовых клещей много лет с успехом применялся на кафедре биологии с паразитологией им. академика E. H. Павловского BMA имени С. M. Кирова.

Методика кормления клещей на морских свинках мало чем отличается по способу предварительной подготовки экспериментального животного от только что описанного. Отличие состоит в том, что «воротник» должен быть картонный или не надеваться вовсе. Особых преимуществ морская свинка как прокормитель клещей по сравнению с кроликом не имеет, более того, небольшие размеры животного не позволяют высадить под маленькую наклейку большое количество клещей, что делает кормление клещей на морских свинках невыгодным.

B некоторых случаях, преимущественно для кормления личинок клещей, используют белых мышей. Животное помещают в широкогорлую банку емкостью 10 л (такие банки обычно используют для содержания мелких животных). Ha дно банки укладывают слой субстрата (сено, солома, опилки), куда смогут уйти напившиеся личинки клещей. Ha шею мыши надевают «воротничок» из картона. Личинок высыпают в банку и они активно нападают на мышь и присасываются к ней. Для того, чтобы личинки не выползали из банки, ее края изнутри обильно смазывают вазелином.

Этот метод кормления имеет ряд недостатков; среди них главными являются: трудность выбора напитавшихся личинок из субстрата и значительный отход их, особенно в случае увлажнения подстилки в банке, где сидит мышь. Поскольку животное остается свободным и лишь «воротничок» защищает клещей от уничтожения, часть личинок неизбежно уничтожается.

Культивирование аргасовых клещей имеет некоторые особенности, вытекающие из характерных черт их биологии и экологии. Хранение аргасовых клещей не требует создания условий повышенной влажности, поэтому в лаборатории их хранят обычно в конических колбах емкостью 50—200 смъ, на дно колбы укладывают кружок фильтровальной бумаги, вырезанный по размеру дна. Для того, чтобы полнее использовать весь объем колбы, в нее вкладывают полоску фильтровальной бумаги, согнутой «гармошкой». Ширина гофрированной полоски должна соответствовать расстоянию от дна до горлышка колбы (рис. 114). Колба плотно закрывается ватно-марлевой пробкой. B одну колбу емкостью 100 CM3 можно поместить до 50 взрослых клещей или нимф IV—V стадий. Кладки, получен

ные от напитавшихся самок, находятся вместе со взрослыми клещами до выхода личинок. Напитавшихся личинок отсаживают в отдельную тару. Клещей разных видов или даже партий, полученных при сборах в различных местах района обследования, хранят, естественно, раздельно.

Рис. 114. Колба, оборудованная для содержания аргасовых клещей.

Учет и записи удобно производить в отдельных тетрадях, имея на колбе либо номер, либо полную запись вида и количества клещей, времени и места сбора, времени кормления (дата каждого кормления отмечается обязательно).

C этой целью удобно наклеить на наружную стенку колбы кусочек липкого пластыря, на котором карандашом делают соответствующие пометки. Несколько колб ставят на подносик (из пластмассы, дерева, толстого картона) и хранят в термостате при температуре 26—28° или при комнатной температуре (в последнем случае переваривание крови, метаморфоз у клещей будут замедлены и накопление лабораторной популяции затянется).

Для того, чтобы в колбах поддерживалась относительная влажность воздуха порядка 60—70%, достаточно при осмотре культуры клещей немного смочить пробку, закрывающую колбу, или поставить в термостат (плотно закрывающийся шкаф), где стоят колбы с клещами, постоянно пополняемую емкость C водой.

Неплохие результаты дает хранение аргасовых клещей в колбах или банках, на дно которых слоем в 5—

6 см насыпается просеянный лесс. Неудобство этого метода состоит в необходимости просеивать субстрат перед каждым кормлением клещей. Кормление аргасовых клещей в лаборатории производят обычно на морских свинках или белых мышах.

B простейшем случае животное фиксируют за конечности на деревянной доске, на брюшной стороне у них выстригают шерсть. Ha выстриженном участке кожи руками фиксируют стеклянный цилиндр с завальцованными краями, куда помещают голодных клещей. Ha 1 белой мыши можно накормить примерно 10 взрослых клещей, на морской свинке весом более 250 г — до 100 нимф последнего возраста и взрослых клещей.

Для того, чтобы животное могло быть использовано многократно, необходимо не держать его в фиксированном состоянии более 1,5—2 ч, так как в противном случае у животного может наступить некроз конечностей. После кормления большой партии клещей животное должно получить отдых (7—10 дней) для заживления кожи в тех местах, где кормились клещи и для

восстановления кровопотери. Наряду с. таким элементарным способом кормления клещей на животном, требующим больших затрат времени экспериментатора (необходимо держать рукой цилиндр с питающимися клещами), существует ряд приспособлений, рационализирующих эту работу. Два из них представлены на рис. 115.

Для кормления клещей на белой мыши применяют специальный станок для фиксадии животного, предложенныйА. Я. Алашкиным. Ha станке прикреплены 2 алюминиевые пластинки 50x10 мм и пружинный механизм. Мышь фиксируют за лапки резиновыми кольцами, брюшком вверх в промежутке между пластинками. Шерсть на брюшке животного коротко выстригают ножницами и выстриженный участок накрывают коробочкой из органического стекла. Последняя крепится на алюминиевых пластинках (с одной стороны, с помощью штыря на пластинке, входящего в пазы на коробочке, с другой — с помоЩью сердечника с пружиной). Коробочка имеет вырезы для крепления на пластинках, а также для изменения положения коробочки в зависимости от величины мыши. Передняя и задняя стенки коробочки имеют полукруглые вырезы для груди и брюшка мыши. Верхняя стенка коробочки имеет отверстие, куда вставлена трубка диаметром 20 мм и высотой 25 мм, служащая для закрепления в ней стеклянного цилиндра с клещами.

Между алюминиевыми пластинками в стенке имеются два отверстия диаметром 15 мм, которые сообщаются с банкой, укрепленной на нижней поверхности стенки крышкой из пластмассы. Банка служит для сбора напитавшихся и неприкрепившихся к мыши клещей во время кормления.

Описанныйстанок не только дает возможность кормить клещей одновременно на иескольких животных, но и помогает исклщчить возможность расползания клещей с животного, что имеет особое значение при работе с зараженньщи клещами.

Для кормления аргасовых клещей на морской свинке может быть рекомендовано следующее приспособление.

. Ha верхней поверхности деревянной доски размером 380x175x25 мм с углублениями, соответствующими форме тела животного, устанавливается 4 винта с барашками (рис. 116) для нрикрепления тесемок, фиксирующих конечностй морской свйНки. Для этой же цели служат два угольника с отверстиями для тесемок. Примерно - посередине доски крепится ремень шириной 25—30 мм, длиной 25 см с пряжкой щля фиксации грудной клетки животного, которое растягивается на станке брюшком вверх; шерсть на участке 6x6 см выстригается ножницами. Ha выстриженную поверхность накладывается кормушка, изготовленная из органического стекла овальной формы с отверстиями сверху и петлями по бокам (в последние продевают концы резинки, фиксирующей кормушку на животном). Клещей высыпают в кормушку, после чего отверстие в се верхней стенке закрывается пробкой. Животное может оставаться растянутым на станке не , более 2 ч. Повторное кормление клещей может производиться на животном через 7—10 дней.

' ■ Станки с фиксированными животными, на которых кормятся клещи, помещают в белые эмалированные кюветы для предупреждения расползания клещей по/недосмотру экспериментатора. Сбор напитавшихся клещей производится мягким пинцетом или акварельной кисточкой (напитавшиеся- личинки).

Гамазовые клещи требуют постоянного поддержания в пробирках, где они содержатся, высокой влажности и достаточно хорошего воздухообмена. Такие условия могут быть созданы в специальных камерах, описанных E. H. Нельзиной (1951) (рис. 117). Могут для этой целй использоваться и пробирки, оборудованные для содержания иксодовых клещей (см.стр.239). Полезно в термостате, где хранятся клещи, постоянно держать сосуд с водой. Развитие клещей идет хорошо при температуре

Кормление кровососущих гамазовых клещей производится на различных видах лабораторных животных, в зависимости от целей опыта или биологии того или иного вида клещей.

26—28°. При просмотре пробирок или других стеклянных емкостей с клещами пользуются лупой или бинокулярным стереоскопическим микроскопом

Рис. 116. Станок для фиксации морской свинки.

При содержании массовой культуры целесообразно использовать метод «заводов», рекомендуемый А. А. Земской (П. П. Петрищева, H. Г. Олсуфьев, 1964). Для разведения 0. bacotinA.san- guineus она использовала 10-литровые банки, применяемые обычно для содержания мелких лабораторных животных. Ha дно банки кладут лист фильтровальной бумаги и ставят маленький фанерный ящичек с двойными стенками, где обитают и размножаются клещи. B качестве прокормителя клещей используют белую мышь, на шею ей надевают воротничок из фотопленки. Внутренний край банки обильно смазывают вазелином для предотвращения расползания клещей.

Рис. 117. Камеры для содержания гамазовых клещей.

A — «москитная пробирка» в модификации E. H. Павловского; Б — камера А. Б. Ланге; а — свободное пространство в пробирках, куда помещаются клещи; б — ватно-марлевая пробка; e — вода; г — вата; д — кружки фильтровальной бумаги; с — прокаленный песок; ж — «гармошка» из фильтровальной бумаги; з — конец трубки, залитой гипсом; и — вентиляционное отверстие, затянутое мельничным газом; к — субстрат для размещения клещей.

Для культивирования D. gallinae в банку вместо фанерного ящичка кладут трубки (отрезки веток бузины с удаленной сердцевиной). Кормят D. gallinae на цыплятах, которых сажают в стеклянную банку на ночь. Чтобы цыплята не загрязняли «завод» и не давили клещей, в банке на расстоянии 8—10 см от дна устанавливается круг из плотного картона. Сверху банка затягивается плотной материей. Клещи D. hirundinis кормятся на мелких птицах (воробьиные), а субстратом для их обитания служат матерчатые полосы (например, из вафельной ткани), свернутые валиком. Банки-«за- воды» содержат при 26—28°, при этом следят за тем, чтобы влажность в «заводах» поддерживалась на высоком уровне (обычно достаточную влажность в банке создает животное — прокормитель).

Рис. 118. Схема устройства тер- моэклектора.

a — субстрат, из которого выбирают материалы; б — металлическая сетка; в — воронка; г — колба; д — крышка с патроном для электролампы; e — ножки термоэклектора.

Собирать клещей рекомендуется акварельной кисточкой, а также с помощью вакуума или термоэклектора (рис. 118). При этом фанерный ящичек или другие предметы и материалы с находящимися на них клещами помещают в эмалированный таз или кювету с высокимистенками, поставленную, в свою очередь, в кювету большего размера с водой.

Краснотелковые клещи содержатся в лаборатории в стеклянных банках или специальных камерах с гигроскопичным субстратом, поддерживающим постоянно высокую относительную влажность воздуха внутри сосуда. B частности, для этой цели используют смесь из 9 частей гипса и 1 части древесного угля, смешанную с водой до получения консистенции густой каши. Готовую массу укладывают на дно банки, где она застывает. Отверстие банки затягивают плотной материей. Банки с клещами держат в термостате при 22—25° и 80—90% относительной влажности.

Для содержания клещей иногда применяют специальные камеры, предложенные Sasa, Miura (1955). Для содержания отдельных экземпляров клещей эти авторы предлагают пробирки диаметром 2 см, длиной 25 см. Ha дно пробирки, имеющее отверстие в центре, помещают смесь гипса с древесным углем слоем около 0,5 см. Пробирку затыкают корковой пробкой, обернутой в бумагу. Для массового содержания краснотелок эти же авторы рекомендовали прибор, состоящий из пластмассовой чашки Петри с крышкой. Ha дно чашки наливают смесь гипса с углем. Такие чашки могут быть использованы и для индивидуального содержания клещей. B этом случае в незатвердевшую смесь гипса и угля вставляют пластмассовые трубочки диаметром 0,4 см и длиной 0,8 см (на высоту чашки). Отверстия трубочек для лучшей аэрации оставляют открытыми.

Пищей некровососущим фазам развития краснотелковых клещей служат яйца различных насекомых (комаров, коллем- бол, стрекоз и т. n.). Перенос клещей (личинок) на животное для питания или из одной тары в другую производят мягкой акварельной кисточкой. B качестве пронормителей используют белых мышей, крысят, хомяков, черепах, ящериц и др.