9 Определение чувствительности выделяемых микроорганизмов к антибиотикам

9.1 Для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам должны быть использованы:

- МПА или агар Хоттингера (для стафилококков, кишечной палочки, псевдомонад);

- сывороточный МПА (для стрептококков).

9.2 Среду разливают по 20 мл в стерильные чашки Петри, расположенные на горизонтальной поверхности.

9.3 Выделенные культуры выращивают на одной из указанных сред, смывают стерильным физиологическим раствором и готовят бактериальную взвесь с концентрацией 1 млрд. микробных тел в 1 см³. Это соответствует 10 ед. по оптическому стандарту.

9.4 На поверхность среды наливают 1 см³ взвеси культуры, орошают ею всю поверхность. Наклонив чашку, излишек культуры отсасывают пипеткой. Чашки с посевами подсушивают при комнатной температуре в течение 40 минут, после чего на поверхности засеянной среды накладывают диски с антибиотиками.

9.5 Диски раскладывают стерильным пинцетом на расстоянии 2 см от края чашки и слегка прижимают к агару. Каждая чашка может служить для испытания 5-6 видов антибиотиков.

9.6 Для лучшей диффузии антибиотика в агар чашки с засеянной культурой и разложенными дисками выдерживают в течение 2 часов при комнатной температуре, затем помещают в термостат при температуре 37°С вверх дном.

9.7 Результаты учитывают через 16-18 часов, для чего определяют линейкой диаметр зоны задержки роста микробов вокруг бумажных дисков, включая и размер дисков.

9.8 Взамен дисков могут быть использованы лунки, которые делают в застывшем агаре металлическим лункорезом диаметром 8-10 мм (по 4 в каждой чашке). Затем в лунки вносят по 2 капли испытуемого препарата и чашки на 20 минут оставляют в покое, после чего их ставят в термостат.

9.9 Учёт проводится по величине зоны отсутствия роста микробов вокруг дисков или лунок, включая их размер:

а) задержки роста нет – микроорганизмы устойчивы к данному препарату;

б) задержка роста до 15 мм – микроорганизмы малочувствительны;

в) задержка роста от 15 до 25 мм – чувствительны;

г) задержка роста более 25 мм – микроорганизмы высокочувствительны.