2.9 Исследования на энтерококки

2.9.1 В колбу с 450 мл стерильного физиологического раствора помещают 50 г корма (разведение 1:10),тщательно встряхивают из шуттель-аппарате 30 минут. Из полученной взвеси готовят последовательные разведения 1:100,1:1000,1:10000.

Из пробирок с измененным цветом среды в зеленый или желтый делают посев на плотную молочно-ингибиторную среду - МИС. Посевы инкубируют в термостат при 37°С в течение 24-48 часов.

2.9.2 Через 24-48 часов изучают рост колоний на среде МИС, идентифицируя различные виды и варианты энтерококков: Str. faecalis и его варианты образует на молочно-ингириторной среде круглые, выпуклые, с ровными краями, черные, с металлическим блеском колонии. Str. faecalis на среде МИС растет в виде мелких, сероватых, иногда почти бесцветных колоний.

2.9.3 Микроскопическое исследование. Грамположительные кокки, диаметром - 0,6-1,5 мкм. Форма сферическая, овоидная или ланцетовидная, сплющенная в поперечнике. Располагаются попарно, цепочками (3-5 клеток) или скоплениями. В основном неподвижны, спор и капсул не образуют.

2.9.4 На жидкой питательной среде для стрептококков большинства серологических групп характерен придонный, часто поднимающийся по стенке пробирки, рост. Энтерококки и пневмококки образуют диффузное помутнение, энтерококки - более интенсивное, в дальнейшем образование осадка: крошковатого, пылевидного, зернистого, хлопьевидного.

2.9.5 На глюкозо-кровяном агаре стрептококки растут в виде мелких росинчатых, прозрачных или слегка мутноватых колоний с ровными краями, окруженных (патогенные виды), зоной гемолиза.

2.9.6 Биохимические свойства у стрептококков варьируют в зависимости от вида. Выделенные культуры стрептококков дифференцируют на основании результатов определения их чувствительности к желчи, оптохину, способности расти в питательных средах с повышенным содержанием хлорида и редуцировать метиленовую синь, а также терморезистентности и других ферментативных свойств (таблица 5).

2.9.7 Для дифференциации Ent. faecalis от Еnt. faecium используют среду с теллуритом калия (последний не растет) или энтерококковую дифференциально-диагностическую среду (первый образует вишнево-красные колонии, второй -бесцветные или белые).

Таблица 5

Биохимические свойства стрептококков

Примечание: «нд» – признак не определен.

2.9.8 Патогенные свойства энтерококков определяют путем постановки биологической пробы на белых мышах. С этой целью внутрибрюшинно заражают трех мышей массой 18-20 г. смывом с суточных агаровых культур, в дозе 500 млн. микробных тел. Концентрацию бактерий устанавливают по бактерийному стандарту. Для смыва культур используют физиологический раствор. Патогенные культуры обычно вызывают гибель одной или более мышей впервые трое суток после заражения. Наблюдение за подопытными мышами ведут в течение 5 суток.