3.3. Частота встречаемости и колонизационная активность энтерококков у женщин с урогенитальным хламидиозом

Проведенными исследованиями установлено нарушение стабильности ассоциативного симбиоза урогенитального тракта женщин при хламидийной инвазии, проявлявшееся в повышении показателей частоты встречаемости и плотности колонизации ассоциативных симбионтов на фоне снижения основных симбионтов влагалища и цервикального канала.

Наиболее выраженные изменения указанных показателей было выявлено у микросимбионта Е. faecalis. В связи с этим были изучены биологические свойства клинических изолятов энтерококков при ассоциативном взаимодействии с C. trachomatis in vivo.

Из всех обследованных женщин с урогенитальным хламидиозом энтерококки были выделены из влагалищного и цервикального канала у 49,5±6,1% и 31,9±6,6%, в группе сравнения – у 23,1±5,6% и 13,5±4,8% соответственно. Установлено, что у женщин с хламидиозом энтерококки обнаруживались почти в два раза чаще, чем у здоровых. Показатель микробной обсемененности Е. faecalis, при урогенитальном хламидиозе увеличивался во влагалище в 2,0 раза, а в цервикальном канале – в 2,2 раза.

Клинические изоляты энтерококков на плотных питательных средах вырастали в виде сероватых колоний диаметром 0,5-1,0 мм с зоной неполного гемолиза по периферии. При микроскопии Е. faecalis представляли собой клетки овальной формы, грамположительные, в ряде случаев – подвижные. Видовую принадлежность энтерококков определяли на основании биохимических тестов, дифференцирующих энтерококки от других грамположительных факультативно-анаэробных кокков (табл.13).

Таблица 13

Результаты биохимических тестов, дифференцирующих энтерококки от других грамположительных факультативно-анаэробных кокков

Изучение вирулентности клинических изолятов Е. faecalis методом внутрибрюшинного заражения мышей показало, что из 167 штаммов энтерококков, выделенных у женщин с урогенитальным хламидиозом, только 118 (70,7%) вызывали гибель животных (рис.5), показатель LD50 /lg этих штаммов варьировал от 3,2±0,3 до 6,1±0,8.

В зависимости от величины данного показателя эти штаммы были разделены на три группы.

Рис.5. Количество вирулентных штаммов Е. faecalis

Так, LD50/lg штаммов первой группы (высоковирулентные – 32 штамма) составлял 3,2±0,3-4,4±0,2; второй группы – 4,5±0,3-5,0±0,4 (умеренно вирулентные – 64 штамма) и третьей группы – 5,1±0,6-6,1±0,8 (слабовирулентные – 22 штамма).

Таким образом, установлено, что только 70,7% изолятов Е. faecalis были вирулентными. Их показатели вирулентности варьировали в пределах от 3,2±0,3 до 6,1±0,8 LD50/lg, наибольшее количество изолятов (54,3%) обладало умеренно выраженной вирулентностью.

С целью изучения патогенных свойства энтерококков, выделенных у женщин с урогенитальным хламидиозом, проводили выявление генетических детерминант патогенности: cpd (бактериоциногенность), cps (адгезия и колонизация) и сylm (токсигенность, цитолизин).

Для обнаружения искомых участков ДНК в работе были использованы суточные культуры E. fаecalis (370 С). Выбранные мишени-гены были проверены системой BLAST, базы данных GeneBank (США) на предмет совпадения с cpd, cps и сylm последовательностями известных микроорганизмов.

Используя набор указанных праймеров, амплифицирующих фрагменты генов cpd, cps и cylm было протестировано 167 штаммов E. faecalis, выделенных из ассоциаций с C. trachomatis, а также 19 штаммов энтерококков, выделенных из симбиозов, где хламидии не встречались.

Исследования показали, что частота встречаемости гена cpd у штаммов E. faecalis, выделенных из ассоциации с хламидиями, составила 61,1±5,3% (p