Методы исследования

Всем пациентам проводилось следующее обследование:

1. Общие клинические методы: сбор жалоб, анамнеза, осмотр ЛОР- органов.

2. Лабораторные исследования: клинический анализ крови, клинический анализ мочи, исследование времени свертывания крови и длительности кровотечения, определение группы крови и резус фактора, биохимический анализ крови, определение антител к вирусам гепатита В и С, ВИЧ и сифилиса.

3. Дополнительные методы: лучевые исследования гортани и органов грудной клетки (рентгенография, томография, КТ, МРТ). Для выявления метастазирования в регионарные лимфатические узлы и другие органы проводилось УЗИ шеи и органов брюшной полости. Заключительным этапом в установке диагноза являлось проведение биопсии новообразования.

4. Специальные методы исследования: фиброларингоскопия с видеофиксацией, морфологическое исследование сыворотки крови с помощью метода краевой дегидратации биологических жидкостей (раздел технологии «Литос-система»).

Метод краевой дегидратации биологических жидкостей. Морфологическое исследование сыворотки крови с помощью краевой дегидратации проводилось в аналитических ячейках квадратных окон ТК4 диагностического набора «Литос-система» (рис. 1). Техника проведения исследования заключалась в следующем:

- забор крови у пациента проводится строго натощак. После венопункции локтевой вены кровь собирается самотеком через иглу в сухую чистую центрифужную пробирку, в объеме не менее 2 мл;

- сыворотку крови получают путем центрифугирования крови при 3000 об\мин в течение 10 минут;

- на каждого пациента заполнялось две тест-карты (10 аналитических ячеек). В каждую аналитическую ячейку наносили по 0,02 мл сыворотки крови в виде капель полуавтоматической пипеткой-дозатором и накрывали их покровными стеклами;

- заполненные тест-карты выдерживали в течение пяти-семи суток, при температуре 20 - 25°С и относительной влажности 55 - 60%;

- исследование морфотипов сыворотки крови проводили при микроскопии в поляризованном свете при увеличении х50 - х100 - х200 - х400 - х630 с помощью поляризационного микроскопа DM2500 фирмы «Leica».

Рис. 1. Тест-карта 4 (ТК4) диагностического набора «Литос-система» для

исследования дегидратированных структур сыворотки крови

Рис. 2. Анизотропные морфотипы сыворотки крови при физиологическом и различных видах патологического процесса в организме: а, в, г, д, е, з - х200; б, ж -х 400. Объяснения в тексте

Морфологическое исследование сыворотки крови, полученной из локтевой вены, проводили при поступлении в стационар, после каждого этапа лечения (при лучевой терапии после каждого курса: до 46 Гр; до 70 Гр, при выполнении хирургической операции - в до и послеоперационном периоде). Далее исследования продолжались при амбулаторном наблюдении за пациентами ежемесячно на протяжении двух лет.

Исследование состава анизотропных морфотипов проводилось по классификации С.Н. Шатохиной, В.Н. Шабалина [144].

Анизотропные морфотипы нормы:

- базисные сферолиты, являются основными структурами сыворотки крови здоровых людей, представляют собой крупный монохромный сферолит с четким ровным контуром, без дефектов и каких-либо включений в структуре(рис. 2а);

- морфотипы адаптационных состояний, выявляются в сыворотке крови здоровых людей, наряду с базисными сферолитами, могут быть представлены либо незавершенными крупными монохромными сферолитами в виде веера или дендрита, либо напротив сферолитами с вторичным ростом по периферии (рис. 2б,в). Присутствие таких структур в сыворотке крови указывает на процессы адаптации организма к условиям внутренней среды и являются вариантом нормы.

Морфотипы патологии:

- маркер деструкции, является неспецифическим, выявляется в сыворотке крови больных с различными хроническими воспалительными заболеваниями; представлен крупными слабоанизотропными сферолитами ячеистой структуры, утратившими правильную форму, с неровными изъеденными краями (рис.

- маркер хронической патологии, представлены мелкими монохромными сферолитами, имеющими зернистую структуру, при этом они располагаются отдельно от крупных сферолитов, также встречаются в сыворотке крови людей с вялотекущей хронической патологией

- маркер злокачественного роста представляет собой комбинацию макро- и микросферолита, при этом зернистый микросферолит находится в центре макросферолита (рис. 2 д,е)

- маркер риска злокачественного роста представлен комбинацией макро- и микросферолита, однако зернистый микросферолит располагается в краевой зоне макросферолита (рис. 2ж);

- маркер дегенеративно-дистофического процесса также представляет собой комбинацию макро- и микросферолита, однако макросферолит имеет резко сниженную степень анизотропии и ячеистую структуру. Зернистый микросферолит, при этом, имеет вид светящегося «глазка» (рис. 2, з).

Новая технология разрешена к клиническому использованию в составе комплекса новых технологий «Морфологический анализ биологических жидкостей Литос-система» (Разрешение ФС № 2009/155 от 15.06.09 г.).

2.4.