1.2. Структура ВД в постнатальном периоде

Межпозвоночные диски одними из первых в организме человека подвергаются возрастным изменениям / Schmori G. , 1932/. Особое внимание стало уделяться возрастным изменениям в связи с выявле­нием связи дегенеративных изменений в диске с целым рядом ортопе­дических и неврологических заболеваний.

Исследованием возрастной морфологии и биохимии межпозвоноч­ных дисков занимались Л.Н.Пономаренко (1956), Г.И.Политов (1959),

К.М.Батуев (1962), Т.П.Виноградова (1962, 1963), Д.Г.Рохлин и А.Е.Рубашева (1963), А.Д.Динабург с соавт. (1965), И.П.Дегтярев (1966), Н.А.Чудновский (1966), А.А.Саблин (1967), С.Д.Беззубик с соавт. (1968), А.В.Авакян (1973), А.В.Бремишвили (1975), С.Ф.Гри- невич (1976), А.З.Данилов (1978), А.И.Борисевич с соавт. (1979),

По данным Т.П.Виноградовой (1962), И.П.Дегтярева и других, к моменту рождения человека межпозвоночные диски полностью сфор­мированы и состоят из трех компонентов: пульпозного ядра, фиброз- ного кольца и двух хрящевых замыкательных пластинок.

Пульпозное ядро раннего периода жизни богато основным вещес­твом, слабо окрашивается. На фоне этой бесструктурной ткани наб­людаются очень тонкие волоконца хаотично расположенные, либо об­разующие волнообразные рыхлые пучки, среди которых располагаются немногочисленные клетки.

При электронномикроскопическом исследовании в основном ве­ществе выявлена гранулярно-филаментозная структура, соответствую­щая протеогликанам / Wassilev , 1971; Butler , Pujiki , 1972; Meachim , 1972; Robles-Marin , 1974; и др./. Предпола­гают, что наличие протеогликанов в виде гранулярно-филаментозной сети создает особые условия для функционального состояния клеток.

Клеточные элементы пульпозного ядра МД человека характеризу­ются разнообразием; среди них различают фибробластические, хонд- робластические, хрящевые и клетки хорды. Последние сохраняются только в детском возрасте, а затем подвергаются распаду. По дан­ным И.П.Дегтярева (1965) они исчезают к 12-ти годам полностью. Ubermut (1929), А.А.Саблин (1967) наблюдали их до 30-летнего возраста. Клетки хорды располагаются группами, ярко окрашиваются и соединяются друг с другом длинными цитоплазматическими отростка­ми. Цитоплазма их бедна клеточными органоидами. Большинство клеток пульпозного ядра имеют сходство с хондроцитами. Одни из них имели овальную форму, большое ядро и полный набор органоидов в цитоплаз­ме. Наличие в них развитого пластинчатого комплекса с большими вакуолями, гранулярной эндоплазматической сети, плотными митохон­дриями свидетельствует о функциональной активности этих клеток.

В перицеллюлярной зоне отдельных клеток описаны многочисленные гранулы, окрашивающиеся рутениевым красным, которые оцениваются как структурные элементы основного вещества, соответствующие гли— козаминогликанами/ Meachim , 1970; Sylvest et al,,I97I;

Azuma » 1978/.

- ІЗ -

Для другого типа клеток ткани пульпозного ядра характерно наличие внутриклеточных филаментов, аналогичных тем, которые наб­людали Meachim G. , Roy S. (1967) в хондроцитах гиалинового хряща. Они отмечают, что небольшое количество филаментов может наблюдаться в цитоплазме функционально активных клеток, хотя при­сутствие большого количества филаментов считается признаком дист­рофических клеток. Б клеточных популяциях суставного хряща кролика внутриклеточные филаменты с возрастом становятся более многочис­ленными / Barnett С.

(1973,1975), Sylvest et al. (1977) считают, что одной из важней­ших функций хондроцитов пульпозного ядра является создание и под­держание определенного гомеостаза матрикса основного вещества.

Среди волокнистых элементов в пульпозном ядре МД человека описаны коллагеновые фибриллы разного диаметра и эластические во­локна. С возрастом количество волокнистых элементов увеличивается и к 20 годам пульпозное ядро приобретает волокнистое строение /Ви­ноградова Т.П., 1963; Дегтярев И.П., 1966; Саблин А.А., 1967; и др./. Тонкие коллагеновые волокна, переплетаясь между собой обра­зуют ажурную сеть. Ближе к фиброзному кольцу они образуют более крупные пучки. Эластические волокна были выявлены Comah (1970), Buckwalter I. с соавт. (1976), Sylvest с соавт.(1977) при электронной микроскопии в пульпозных ядрах лиц юношеского.и зрело­го возраста.

Buckwalter I. с соавт. (1976) считают, что эластические волокна пульпозного ядра имеют более разнообразную форму и иную ориентацию по отношению к коллагеновым фибриллам, чем таковые в фиброзном кольце. Эту разницу авторы объясняют различными функци­ями эластических волокон: в фиброзном кольце они препятствуют чрезмерному растяжению, а в пульпозном ядре - сжатию. У животных (собаки, кролики, мыши, крысы, тушканчики) эластические и колла-

геновые волокна в пульпозных ядрах ОД не выявлены /Барер Ф.С., 1980; Butler et al. , 1972; Comah И Meachim , 1970; И ДР./. '

Кроме фибрилл коллагена и эластических волокон в межклеточном веществе пульпозных ядер ОД выявлены необычные волокнистые струк­туры в виде поперечно-исчерченных филаментозных агрегатов (СВРА) с поперечными периодами равными 120 нм. Эти агрегаты наблюдались как в нормальных, так и патологически измененных пульпозных ядрах ОД человека / Meachim И Comah , 1970; Sylvest et al. » 1977; Buckwalter et al. , 1977; и др./. Аналогичные структуры описаны в пульпозных.ядрах ОД кроликов /smith и Serafini - Fracassini , 1968; Comah И Meachim , 1970/.

Подобные образования чаще всего обнаруживаются в опухолях неврогенного происхождения / Ramsey , 1965; Friedman et al. , 1965/, в коже здоровых людей и больных склеродермией, волчанкой /Брагина S.E. и др., 1979; Pillai , 1964; Hashimoto , 1973/, в суставном хряще / silberger et al. , 1963/, строме миокарда / Banfield et al. , 1963/, В опухолях КОЖИ / Hashimoto ,

Ohyama , 1971/ и др. В литературе можно встретить термин тель­ца Лиюза по имени автора, обнаружившего и описавшего их в опухо­лях мозга /визе , I960/, или ’’зебровидные тельца”. Термин попе­речно-исчерченные филаментозные (нитевидные) агрегаты сокращенно СВ/⁷А, нам кажется более приемлемым, так как отражает структуру этих образований. Эти агрегаты имеют различную форму и периодич­ность от 36 до 120 нм. Природа их не свосем ясна. А.Б.Шехтер (1980) рассматривает их как необычные формы коллагена. Часть ав­торов / Silberger et al. , 1963; Ramsey , 1965; Hashimoto , Ohyama , 1974; и др./ полагают, что они близки к фибриллам PLS , образующихся в определенных условиях, но имеют большую периодичность - 280 нм. Большинство авторов, описавших СВР А, по­лагают, что они образуются вследствие ’’дефектного" фибриллогене­за в связи с качественными и количественными особенностями биосин­теза коллагена или нарушением их взаимоотношений с гликозаминогли- канами и гликопротеинами.

Другие авторы / Nametsche К. , Gansler Н. et al. » 1977/ считают, что описанные агрегаты являются стадиями дезорганизации и лизиса коллагеновых волокон, обосновывая свое положение наличи­ем последовательных стадий перехода интактных коллагеновых фибрилл в поперечно-исчерченные нитевидные агрегаты. Мы не разделяем этой точки зрения, так как наблюдали СВ Л в грудном возрасте, когда нет признаков дезорганизации коллагеновых фибрилл.

На роль механических факторов в возникновении СВ ГА указыва­ют Pillai Р. А. (1964), Silberberg 0. et al. (1963)»

Garther J. (1966).

Известно, что структура пульпозного ядра значительно меняет­ся с возрастом.

-16 -

тановский с соавт. (1954) объясняет разрушением коллагеновых во­локон.

Т.П,Виноградова (1963) также описывает наличие полостей в центральной части пульпозного ядра в виде щели неправильной формы с боковыми ответвлениями. Она отмечает, что полости наблюдаются не только в старческом, но и в юношеском и даже детском возрасте. По ее мнению, эти полости имеют функциональное значение, так как в них нередко вдаются ворсинчатые выросты пульпозного ядра, а по краям можно видеть многоклеточные группы хрящевых клеток. В пожи­лом возрасте полости окаймлены на отдельных участках гиалиновым хрящом, как это имеет место в диартрозах. У ряда лиц эта полость отсутствует. Развитие таких полостей Т.П.Виноградова связывает с подвижностью позвоночника, а не с дегенеративными изменениями.

Как было отмечено ранее, пульпозное ядро с возрастом не только меняет свою структуру в сторону частичного приближения к строению волокнистого хряща, а в ряде случаев гиалинового хряща, но и те­ряет воду /Виноградова Т.П., 1963/. Оба эти вида тканей содержат меньше воды, чем пульпозное ядро, поэтому естественно, что пуль­позное ядро становится беднее водой именно вследствие изменения строения, а не вследствие ’’высыхания".

В Х954 году Garden s. и сотр. выделили из пульпозных ядер дисков человека гликозаминогликаны двух видов: хондроитин +

6 - сульфат и кератан-сульфат. Позже выделены были еще дерматан­сульфат и гиалуроновая кислота / Batler , 1971; Hikasa М. , 1978; Kitahara н. , 1979; и др./. Результаты исследований в области гликозаминогликанов показали, что эти биополимеры имеют исключительно важное значение в процессах фибриллогенеза, транс­порта воды и ионов в тканях /Мазуров В.Й., 1974; Бычков С.М., 1979;

Нарреу Р. et al. , 1974; Ghoah Р. et al. , 1977; Hikasa M. , 1978/. Кроме того, были показаны возрастные изменения в гликоза- миновом составе протеогликанов МД человека и собак. Так, с воз­растом происходит увеличение содержания кератан-сульфата (с 5-7 лет) и сиаловых кислот, уменьшение размеров молекул и значитель­ное усиление взаимодействия протеогликанов с коллагеном.

Иоуэ (1962) и Мураяма (1977) указали на постепенное возрас- тнов накопление содержания коллагена в пульпозном ядре и вместе с тем быстрое уменьшение гексозамина, которое начинается после 20 лет, что является по их мнению показателем содержания углево­дов в протеогликонах. Будакк (1964) также обратил внимание на из­менение соотношения количества хондроитин-сульфата и кератан-суль- фата с возрастом. При уменьшении общего количества хондроитин­сульфата уменьшается, главным образом, его А-изомер, который име­ет преимущество в возрасте от I до 4 лет, в возрасте 60-80 лет он замещается С-изомером. При остеохондрозе и в пролабированных дис­ках также отмечено повышение концентрации кератан-сульфата на фоне снижения содержания гликозаминогликанов и накопление неколлагено­вых белков типа гликопротеинов, служащих для ориентированного от­ложения коллагена /Слуцкий Л.И., 1973; Леонтьева Ф.С. и др., 1977; Шубич М.Г. и др., 1980; Davidson Е. et al. , 1959; Lechtonen et al. , 1971/.

Общее количество гликозаминогликанов и соотношение между ни­ми, влияющие на созревание коллагена и содержание воды в пульпоз­ном ядре, являются основными биохимическими факторами в процессе возрастных и дегенеративных изменений дисков.

Биохимические изменения,.отмеченные с возрастом и при различ­ных дегенеративных процессах, идентичны и приводят в конечном сче­те к снижению содержания гликозаминогликанов при относительном нарастании концентрации кератан-сульфата, накоплении неколлагено­вых белков типа гликопротеинов, которые служат основой для ориен­тированного отложения коллагена, обеспечивая образование попереч-

них связей между микрофибриллами /ІІІубич М.Г. и др., 1980; -

Podrazki et al. , 1970; Pyraon et al., 1972/. В результате усиленного синтеза коллагена происходит фиброзирование диска.

Фиброзное кольцо у новорожденных и в первые годы жизни имеет вид слоистого ободка, который ограничивает пульпозное ядро и сос­тоит из двух зон: наружной - плотной и внутренней - зоны волокнис­того хряща.

Наружный слой фиброзного кольца состоит из плотных, узких, резко отграниченных друг от друга пластинок, которые располагают­ся концентрическими рядами, охватывая часть сегмента диска. На задней поверхности диска пластинки фиброзного кольца уже, между пластинками нередко обнаруживаются кровеносные сосуды различного диаметра. Чаще сосуды располагаются в боковом и задне-боковом от­делах фиброзного кольца. Основу каждой пластинки составляют колла­геновые волокна, плотно прилегающие друг к другу. В толще пласти­нок можно видеть эластические волокна, имеющие цилиндрическую фор­му и располагающиеся параллельно коллагеновым фибриллам /Дегтя­рев И.П., 1966; Саблин А.А., 1967; Buckwalter с соавт., 1976; и др./. ■

Клеточные элементы пластинок представлены зрелыми дифферен­цированными фибробластами, имеющими вытянутую форму. Коллагеновые волокна в основном окрашиваются пикро-фуксином в красный цвет, но отдельные пучки волокон в толще наружных пластин принимают желто­оранжевую окраску /Дегтярев И.П., 1967/.

Внутренний слой фиброзного кольца представлен волокнистым хрящом, наружная часть которого еще сохраняет пластинчатое стро­ение. Пластинки этой зоны широкие, рыхлые, не имеют четких границ, но располагаются концентрически. В более глубоких слоях пучки во­локон, образующие переплетения, дают множественные анастомозы с соседними пучками /Дегтярев И.П., 1967; Саблин А.А., 1970/.

На границе с пульпозным ядром фиброзное кольцо построено из тонких, нежных волоконец, расположенных беспорядочно - это слой тонковолокнистого хряща. Волокнистый хрящ богат клетками, среди которых наблюдаются и фибробластические. Хрящевые клетки распола­гаются, как правило, в полостях. Количество хондроцитов увеличи­вается по мере приближения к пульпозному ядру. В слое тонковолок­нистого хряща хондроциты могут образовывать многйчйенные изоген­ные группы.

Электронномикроскопический метод исследования фиброзного коль­ца межпозвоночного диска позволил уточнить особенности его струк­турной организации. Было показано, что фиброзное кольцо МД явля­ется сложной конструкцией, состоящей из плотных ориентированных коллагеновых фибрилл, пересекающихся под разными углами /Панков Е.Я. и др., 1980; inoue ы. , Takeda , 1975/. Авторы показа­ли, что в наружном слое фиброзного кольца коллагеновые фибриллы большого диаметра и относительно однородного строения. Ближе к цен­тральной части отмечена резко выраженная неоднородность толщины коллагеновых фибрилл.

С возрастом соединительнотканные наружные пластинки приобре­тают желтоЕато-оранжевый цвет. Пластинки становятся заметно шире, появляется больше хрящевых клеток и изогенных групп, расширяется зона тонковолокнистого хряща. К 25-30 годам пластинки наружной зо­ны становятся более плотными и окрашиваются в желтый цвет, что не свойственно коллагеновым волокнам и свидетельствует об изменении тинкт^ориальных свойств. Пучки коллагеновых волокон в зоне грубо­волокнистого хряща становятся толще и грубее. Нарастает количество хрящевых клеток В этот период можно видеть редкие очажки зернисто­го распада волокон, короткие трещины, идущие вдоль пластин. В даль­нейшем происходит еще большее огрубение пучков коллагеновых воло­кон, а к старости они становятся гиалинизированными /Политов Г.И., 1959; Дегтярев И.П., 1966/. Появляются некротические клетки в изо­генных группах, изменяется форма эластических волокон, они фраг- меятируются и приобретают форму запятой.

A. А.Саблин (1967) отмечает, что коэффициент упругости и пре­дельная нагрузка, которую выдерживают диски при растяжении и сжа­тии, определяется их возрастными особенностями и количественным соотношением органических и неорганических компонентов. Так, по его данным, количество Са в дисках нарастает до 3 лет, к 9 годам резко снижается, а затем стабилизируется до 25 лет и к 56 годам достигает максимума. Наибольшая растяжимость дисков наблюдается

у детей 7-12 лет и составляет 83% при деформации растяжения и 120% при деформации сжатия. После 22-30 лет этот показатель снижается и к 60 годам диски имеют относительное удлинение 30% (у мужчин) и 50% (у женщин) при деформации сжатия и до 24% при деформации рас­тяжения.

Наименьший предел прочности МД наблюдается у плодов 8-9 мес, что составляет 39,95 кг/см^. В дальнейшем происходит увеличение предела прочности, который достигает максимума к 22-30 годам и составляет 100 кг/см^ при деформации сжатия и 38,3 кг/см^ при де­формации растяжения. С возрастом этот предел прочности значитель­но уменьшается. Максимальная прочность МД отмечается к 22-30 го­дам. Местами наименьшего сопротивления МД является наружный отдел фиброзного кольца и зона вокруг пульпозного ядра - то есть зона тонковолокнистого хряща. При деформации сжатия прежде всего нару^- шается именно эта зона вокруг пульпозного ядра, а при деформации растяжения - задний отдел фиброзного кольца /Саблин А.А., 1967/.

B. Х.Райхинштейн (1975) выявил снижение собственного (вне наг­рузки) внутридискового давления с возрастом по мере развития в диске дистрофических процессов. Динамика соотношения внутридиско­вого давления с наружным свидетельствует, по его мнению, о том, что малые и средние нагрузки воспринимаются, в основном, пульпоз- ным ядром, которое преобразует их в тангенциальные силы, действу­ющие на фиброзное кольцо. По мере увеличения сил сжатия, на фиброз ное кольцо начинают действовать в большей степени вертикально нап­равленные нагрузки. В дисках с выраженными дегенеративными измене­ниями пульпозное ядро теряет свои гидрастатические свойства. Вели­чина давления в таких дисках снижена из-за наличия трещин и очагов распада ткани. Нарушение гомогенности структуры пульпозного ядра, наблюдаемое с возрастом, приводит к снижению давления внутри дис­ка и нарушению нормальной его функции, что вызывает увеличение наг рузки на фиброзное кольцо.

Хрящевая замыкательная пластинка занимает положение между телом позвонка и пульпозным ядром. По своему происхождению она тесно связана с хрящевым зачатком позвонка, поэтому Реасок (1953) рассматривает ее как эпифиз позвонка. В постнатальном пери­оде она служит источником роста позвонка. У взрослых людей плас­тинка очень прочно соединяется с диском и легко отделяется от по­верхности позвонка, что позволяет считать ее составной частью дис­ка, /Виноградова Т.П., 1951; Schmorl , 1929; и др./. Хрящевые пластинки представляют собой остатки хрящевых тел позвонков. У но­ворожденных они составляют 1/4 высоты тела позвонка, а с возрас­том превращаются в тонкую прослойку.

В пластинках на стороне, обращенной к позвонку, идет активный процесс пролиферации хрящевых клеток. Пролиферативная активность хрящевых клеток снижается к 16-18 годам, а в 19-20 лет затухает совсем /Дегтярев И.П., 1966/. На месте росткового слоя остается четко вырисовывающаяся базофильная линия, которая разделяет кост­ную ткань позвонка от диска. В толще ростковой зоны хряща можно встретить полости, заполненные зернистой или глыбчатой гомогенной массой, лишенной клеток и какой-либо структуры. Особенно часто такие очаги дистрофии отмечаются в возрасте 12-14 лет.

Т.П.Виноградова (1951) считает, что появление очагов дистро­фии в эпифизарной зоне - явление физиологическое. Они, по ее мне- нию, имеют значение в росте тела позвонка в ширину. И.П.Дегтярев (1966) присоединяется к такой трактовке. К 17-ти годам зона роста исчезает и костные балки тел позвонков непосредственно соприкаса­ются с гиалиновым хрящом замыкательной пластинки.

С другой стороны, хрящевые замыкательные пластинки граничат с пульпозным ядром. Тонковолокнистое основное вещество пульпозно­го ядра постепенно переходит в основное вещество гиалиновой пластин­ки. После 17-20 лет самые наружные пластины фиброзного кольца не­посредственно соединены с костной тканью тел позвонков, так как гиалиновая пластинка по краям отсутствует. Иногда в этой зоне между пучками коллагеновых волокон фиброзного кольца еще встречаются участки гиалинового хряща, С возрастом хрящевые пластинки подвер­гаются заметным изменениям. Уже в зрелом возрасте в них появляют­ся очаги распада основного вещества, участки кальцификации и даже оссификации.

Резюме. Проведенный наїли анализ литературы возрастных изменений межпозвоночных дисков человека показал, что до настоя­щего времени осталось много спорных и не решенных вопросов. Одним из основных - это раннее развитие дегенеративных изменений в МД. Данные литературы, касающиеся характера этих изменений, особенно наблюдаемые в периоды детства, не однозначны. Нет единого мнения в вопросе о том, считать ли наличие полостей в пульпозных ядрах физиологическим явлением /Виноградова Т.П., 1963/, или признаком дегенерации ткани /Дегтярев И.П., 1966/. То же самое можно сказать и о наличии кист и полостей, заполненных клетками костного мозга и сосудами, наблюдаемые в хрящевых замыкательных пластинках.

Менее исследованным, по нашему мнению, является вопрос о том, какие структурные элементы в пульпозном ядре обеспечивают и регу­лируют высокую степень гидратации ткани, особенно в зрелом возрас­те, когда пульпозное ядро приобретает волокнистую структуру.

Отсутствует подробная характеристика клеточных и волокнистых элементов ткани диска в разные возрастные периоды. Эти данные мог­ли бы быть полезны не только для дифференцировки возрастных изме­нений от дегенеративных, но и помогли бы понять причины развития последних. Так как именно клеткам, по современным представлениям, принадлежит ведущая роль в поддержании определенного гомеостаза ткани, особенно в условиях аваскулярной ткани, какой являются МД.

Несмотря на то, что данные о возрастных изменениях и структу­ре фиброзного кольца довольно многочисленны, но доказательства его способности растягиваясь и сжимаясь, быстро реагировать на малей­шие изменения давления в пульпозном ядре, только прочностью плас­тин и наличием в них эластических волокон, не достаточно убедитель ны.

Нагл кажется, что исследования возрастной характеристики уль­траструктуры МД могли бы помочь в решении некоторых из этих воп­росов.

Глава 2

МАТЕРИАЛЫ И иода ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучение возрастных изменений ультраструктуры межпозвоночных дисков (МД) проводилось на трупном материале, взятом во время ау­топсий в моргах г. Москвы. Забор материала производился через 6-9 часов с момента констатации смерти и выяснения анатомического ди­агноза.

Для исследования брали межпозвоночные диски на уровне 4-7 грудных позвонков у погибших людей, не имевших заболеваний позво­ночника и не получавших длительного медикаментозного лечения, в основном, от лиц погибших в результате несчастных случаев. Выбор грудного отдела позвоночника для выявления возрастных изменений ГУЩ определялся двумя условиями: во-первых, грудной отдел является наиболее травматическим для детского возраста; во-вторых, в пояс­ничном отделе чаще, чем в других развиваются дегенеративные изме­нения.

Кроме того, имеющиеся в литературе данные по возрастным изме­нениям, в основном, были получены при исследовании ГУЩ поясничного отдела. Общие закономерности развития возрастных изменений ВД еди­ны для всех отделов позвоночника. Так как грудной отдел испытывает меньшие статические нагрузки, чем поясничный, и дегенеративные изменения развиваются медленнее, то по нашему мнению, этот отдел наиболее удобен для детального изучения перестройки ткани ГУЩ с возрастом.

Всего было исследовано 147 дисков от 49 трупов в различных возрастных группах от новорожденных доб‘5 лет.

В своей работе мы пользовались схемой возрастной периодизации, принятой на международном симпозиуме по возрастным особенностям (Москва, 19 65)(схема I).

Для световой микроскопии материал фиксировали в 10% нейтраль-

Схема I

Схема возрастной периодизации

ном формалине, обезвоживали этиловым спиртом возрастающей концен­трации и заливали в целлоидин. Препараты окрашивали гематоксилином и эозином, пикро-фуксином и елейном на эластику.

Для трансмиссионной электронной микроскопии (ТЭМ) брали пос­лойно кусочки ткани размером 2,5 х 2 мм из различных участков пульпозного ядра, фиброзного кольца и хрящевых замыкательных плас- тинок (схема 2).

N 2 СХЕМА ЗАБОРА ОБРАЗЦОВ В ЛИСКАХ

Материал фиксировали в 2,5% растворе глютаральдегида на фосфатном буфере с pH 7,2-7,4 в течение 1,5-2 часов. Затем кусочки ткани отмывали в 2-х сменах фосфатного буфера в течение суток и дофик­сировали 2% Os 0^ на фосфатном буфере с рн 7,2-7,4 по Миллонин гу в течение 2 часов. Обезвоживали в растворах этилового спирта возрастающей концентрации и заливали^аралдит по следующей схеме: спирт 50° - 2 смены по 15 минут, спирт 70° - 2 смены по 20 минут, спирт 70° + уранилацетат (насыщенный р-р) - на ночь в холодильни­ке, промывали 70° спиртом, спирт 96° - 3 смены по 15 минут, спирт 100° - 3 смены по 15 минут, спирт 100° + ацетон (1:1) - 3 смены по 10 минут, ацетон абсолютный - 3 смены по 15 минут, ацетон + аралдит (1:1) - 3 смены по 5 минут, аралдит I - на ночь при ком­натной температуре, аралдит 1-І час, аралдит П + катализатор - I час и заливка в аралдит її. Полимеризация при температуре 60°С в течение 48 часов. Срезы получали на ультратоме фирмы LKB-8802 (Ш), монтировали на сеточки и контрастировали цитратом свинца по Reynolds R. s. (1963). Срезы просматривали в электронном мик­роскопе JEM-7A с увеличением от 4200 до 70000.

Для выявления ПГ кусочки ткани фиксировали 2 часа при комнат­ной температуре с добавлением 0,2$ раствора рутениевого красного к 2$ раствору глютаровому альдегиду / Thyberg et al. , 1973/.

При использовании рутения все растворы готовились на кокадилатном буфере с pH 7,34. Дофиксировали 2$ раствором четырех окиси! ос­мия, с добавлением 0,05$ раствора рутения красного в течение 1-1,5 часов. Затем обезвоживали и заливали ткань в аралдит по опи­санной ранее схеме. .

Кроме рутения красного мы применяли сафранин ”0" по методу Thyberg et al. (1973). Для этого кусочки ткани фиксировали 2 часа при комнатной температуре в 2$ растворе глютарового альдеги­да на фосфатном буфере с pH -7,4 с добавлением 0,1$ раствора сафранина ”0". Затем отмывали буфером и дофиксировали в 2$ раст­воре Os с добавлением 0,025$ раствора сафранина ”0” в течение .

2 часов. После фиксации кусочки ткани обезвоживали в спиртах воз­растающей крепости и заливали в аралдит.

Для сканирующей электронной микроскопии (СЭМ) кусочки ткани фиксировали в 3$ растворе глютаральдегида на фосфатном буфере с рн 7,2-7,4; затем сутки отмывали в проточной воде и дегидратиро­вали в спиртах возрастающей концентрации, обезжиривали эфиром. Высушенные в вакууме образцы напыляли медью. Для выявления архи­тектоники фиброзного кольца использовали методику исследования на срезах. Срезы толщиной 20-25 микрон готовили из залитых в цел­лоидин или парафин блоков, либо резали на замораживающем микрото­ме без предварительной заливки. Полученные с блоков срезы освобож­дались от заливочной среды и затем высушивались и напылялись, опи­санными ранее способами. Напыленные медью срезы просматривали в электронном микроскопе js М-15 с увеличением от 100 до. 10000.

Методика использования срезов для СЭМ ткани МД, по нашему мнению, дает лучшие результаты, так как отчетливо сохраняет ар-

хитектонику волокнистых структур.

Морфометрическое исследование дисков проводили на гистологи­

ческих срезах подсчетом количества клеток пульпозного ядра в поле зрения при увеличении окуляра 7 и объектива 20. Подсчет начинали от центра пульпозного ядра к периферии, то есть так же, как прово­дился забор материала для электронной микроскопии. В каждом пре­парате просчитывались 50 полей зрения. Затем расчитывали среднюю арифметическую М и среднеквадратическое отклонение среднего ариф­метического М для каждой возрастной группы. Результаты расчетов приведены в таблице I.

Таблица I.

- ЗО -