Морфологические методы
Объектами гистологического исследования являлись яичники. Органы фиксировали в жидкости Карнуа в течение 2-3 часов, обезвоживали и заливали в парафин[3]. С помощью ротационного микротома готовили срезы толщиной 5-7 мкм, депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином и эозином.
Полученные препараты просматривали в микроскопе Биолам ЛОМО при увеличениях окуляра х15, объектива х 8, х20 и х40. Цифровые фотографии получали при помощи фотоаппарата Canon ГМ PowerShot А85 (€> Canon Inc.) с разрешением 2272 x 1704 пикселов, обрабатывали в графическом редакторе Corcl®X3 (© Corel Inc.).Дизайн эксперимента
| Серии опыта, методы воздействия, количество животных | Сутки опыта | ||||||||
| А7 | 9 | 11 | 15 | 1 16 і | 21 | I I 36 1 | 66 | ||
| ХГ(ЗООЕД) инсулин (2,5 ЕД) монополярная коагуляция 36 крыс | Модель кист + ляектрохирургическое лечение (основная группа) | ||||||||
| 1 - ежедневно | |||||||||
| 1 | операция | 4- (2 суг после операции)і | (7сут после і операции) | (22 сутки после операции) | 1 | ||||
| #© і | |||||||||
| Модель кист (группа сравнения) | |||||||||
| | - ежедневно | |||||||||
| 2 | ХГ (300 ЕД) инсулин (2,5 EJ!) 36 крыс | (Зсуг сформиров анной модели) | Г 1 (5 суг сформиров анной модели) | (10 суг сформиро ванной модели) | •I (15 суг сформиро ванной модели) | 4 (30 суг сформиро ванной модели) | 4- (60 суг сформиро ванной модели) | ||
| 1 | і | 1 | ! #© | К® | |||||
| Вел воздействия | Интактные животные (контрольная группа) | ||||||||
| 3 | -Г | + J | 1 - 1 | і | + 1 | + | |||
| 18 крыс | 2© | ||||||||
| Всего 90 крыс | |||||||||
Примечание: | - введение препаратов
# - электронная микроскопия
-*• - забор материала ® - гормоны крови
Морфоколичественный анализ. Для оценки функциональных изменений в яичниках и объективизации результатов проводили морфометрические исследования в соответствии с рекомендациями Г.Г .
Автандилова (1973, 1980, 1990) 125, 106]. Для морфоколичественного анализа структурной перестройки тканевых компонентов яичников использовали окулярную измерительную сетку, состоящую из большого квадрата, содержащего 25 точек. В определении удельных объёмов изучаемых структур применяли фундаментальный в стереологии принцип Кавальєри-Акера-Глаголева: отношение числа точек, попавших на объект, к общему числу точек (Рр) равно удельной площади сечения объектов (Sa) и равно удельному объёму объектов (Vv) в образце, т.с. Рр - Sa = Vv. При измерении объёмных соотношений учитывали количество точек окулярной сетки, случайно совпадающих с изучаемыми структурами. С целью получения точных данных и обеспечения 95% уровня безошибочного суждения считали не менее 100 квадратов в каждом яичнике. Для изучения межтканевых взаимоотношений при экспериментальных ФнК и их ЭХЛ монополярной коагуляцией исследовали динамику удельного объема основных структурно-тканевых элементов яичника, ФК и ЮКТ. Подсчёт примордиальных и растущих (первичных, вторичных, третичных) фолликулов, атретических (Іюлликулов и тел, жёлтых тел, кист проводили на серийных срезах через каждые 250-300 мкм ткани яичника.Ультраструктурные методы [4] . Изучение ультраструктуры яичников проводили методом трансмиссионной элекгронной микроскопии. Материал фиксировали в забуференном 0,1 М какодилатным буфером (pH- 7,4) 2,5% растворе глютарового альдегида в течение 2 часов по D.D. Sabatini, К. Bcnsch, R.J. Barmctt (1963) при температуре 4°С. Далее промывали какодилатным буфером (рИ = 7,4), посгфиксировали в 1% растворе четырехокиси осмия, дегидратировали в этиловых спиртах восходящей концентрации и заключали в
смесь смол эион-аралдит. Полутонкие срезы толщиной 1 мкм окрашивали толундиновым синим. После выбора блоков, содержащих необходимые фрагменты ткани, приготавливали ультратонкис срезы. С каждого яичника приготавливали по 2-3 блока. Ультратонкие срезы толщиной 60-100 нм готовили по методике Б. Уикли (1975) па ультротоме 4;U1trotoin Ш” (“LKJET’, Швеция). Полученные срезы наносили на медные сетки с формваровой пленкой-подложкой и контрастировали 2% раствором уранилацетата на 50% этаноле и цитратом свинца по Е. Reynolds (1963). Полученные препараты просматривали и фотографировали в электронном микроскопе ‘ТЕМ-100 СХП” (“JEOL”, Япония) с апертурной диафрагмой 25-30 мкм при ускоряющем напряжении 80 кВ и JEM-7A (Япония).
2.1.2.
Еще по теме Морфологические методы:
- Методы морфологического исследования
- Морфологические методы исследования
- Морфологические и иммуногистохимические методы исследования
- Морфологическая характеристика микобактерий при окраске по методу Циль-Нильсена
- 2.1 Морфологическая классификация
- Морфологические проявления апоптоза
- Клинико - морфологическая характеристикаэлементов кожной сыпи
- Морфологические признаки некроза
- Морфологическое подтверждение диагноза
- Морфологические изменения в почках
- 2.4 Морфологическое исследование
- Морфологические исследования
- Морфологическое исследование тонкой кишки и печени
- Морфологическая классификация
- Морфологические особенности.
- Морфологические изменения в легких у больных сахарным диабетом
- Результаты морфологического исследования
- Морфологические изменения артифициального мочевого пузыря