6.1.Обоснование возможности использования инкубации клеточной массы крови с антибиотиками для лечения больных с ГВЗПМ

Исследования по обоснованию возможности использования инкубации кле­точной массы крови с антибиотиками для лечения больных с ГВЗПМ проведены на базе клинической лаборатории кафедры лабораторной диагностики Новокузнецкого ГИУВа и ЦНИЛ института (зав.

Оценка эффективности связывания антибиотиков с клетками крови была проведена экспериментально in vitro. Клеточную массу получали из 400 мл цит­ратной донорской крови (соотношение антикоагулянта и крови во всех случаях было 1:4) при центрифугировании на лабораторной центрифуге ЦЛП 3-3,5, при 700 g, в течение 20 минут с последующим удалением плазмы.

11ри обосновании метода, в условиях in vitro исследовали результат инкубации клеточной массы: 1) с антибиотиком и 2) с антибиотиком и АТФ. Время инкубации - от 5 до 30 минут было обусловлено временным промежутком, при котором иссле­дуемые свойства клеток и накопление в них препарата оставались неизмененными. Температура при исследовании была выбрана комнатной температуры (22-24°С) для упрощения методики при дальнейшем использовании в практических целях.

Дозу 1% раствора АТФ подбирали из расчета 0,01 мл на 1 мл клеточной мас­сы, что не превышало разовой терапевтической дозы при других способах введения АТФ. В качестве антибактериального препарата использовали 4% гентамицина сульфат из расчета 0,4 мг на 1мл клеточной массы, что соответствует средней разо­вой дозе при использовании этого антибиотика при лечении ОВЗПМ.

Для оценки изменения функционального состояния лейкоцитов (ГОД действием АТФ и антибиотика использовали оценку их бактерицидной и фагоцитарной актив ности. Бактерицидные кислород - зависимые системы нейтрофильных

іранулоцитов оценивали по способности восстанавливать нитросиний тетразоль (ИСТ), а фагоцитарную активность клеток - по способности поглощать трепановый синий по методике R.Z. Baehncr, D.G.

Совместная инкубация клеточной массы с АТФ и антибиотиком, либо просто с антибиотиком в течение 30 минут приводила к накоплению гентамицина в клеточ­ной массе, причем присутствие АТФ увеличивало количество связавшегося с клет­ками антибиотика. Механизм влияния АТФ на проницаемость плазматической мем­браны для антибиотика пока не ясен. Такое связывание могло осуществляться как за счет усиленной фагоцитарной активности лейкоцитов, так и путем неспецифическо­го связывания препарата на клеточных мембранах. Последнее предположение под­тверждается в работах К.П. Кашкина, 3.0. Караева (1984), показавших возможность транспорта аминогликозидов и других антибиотиков на мембранах клеток крови [50 ]. Известно, что на лейкоцитах представлено множество рецепторов, практически ко всем биологически актизным веществам, в том числе и к АТФ. Рецепторы к АТФ представлены мембранными белками, активация которых приводит к накоплению цАМФ внутри клеток, изменяет метаболизм клеток-мишеней. Это действие АТФ приводит к образованию на поверхности клеток большого количества рецепторов. Опосредованный рецепторами эндоцитоз совершается очень быстро, так что одна клетка каждые два часа способна переводить внутрь область, эквивалентную всей клеточной поверхности [50,129].

В исследованиях Д.А. Швецова (1996) показано, что связывающая способ

ность клеток крови зависит также от соотношения между объемом жидкостной среды и объемом самих органоидов [129].

Таким образом доказано, что инкубация клеток крови с АТФ и гентамици­ном приводит к активации эндоцитоза в лейкоцитах, ч то, по-видимому, способству­ет накоплению антибиотика в полиморфноядерных гранулоцитах. Усиление эндо­цитоза сопровождается активацией миелопероксидазо-зависимых бактерицидных систем гранулоцитов, особенно выраженной в присутствии АТФ. Все это приводн і к повышению способности гранулоцитов «переваривать» поглощенные бактерии.

Из полученных результатов, можно предположить, что лейкоциты, после инкубации с АТФ и антибиотиком и возврата в кровоток, могут' за счет хемотаксиса попадать в очаг* воспаления, где за счет стимулированного экзоцитоза, или после своего разрушения высвобождать ииноцетированный во время инкубации препарат, то есть осуществлять целенаправленную доставку антимикробного средства в очаг воспаления.

Можно предположить, что, наряду с полиморфноядерными гранулоцитами, определенную роль при ИКМ с антибиотиком играют эритроциты, так как в много­численных исследованиях показано, что эритроциты, наряду с альбуминами, явля­ются одной из важных систем транспорта молекул и экзогенно введенных препара­тов к органам - мишеням [50,52]. При этом основным механизмом, обеспечивающим такой транспорт является неспецифическая сорбция молекул на эритроцитарных мембранах.

Транспорт связанных с эритроцитарными мембранами

лекарственных препаратов в очаг воспаления может осуществляться за счет по­вышения адгезивной и агрегационной способности эритроцитов.

Итак, полученные экспериментально - in vitro - данные свидетельствуют о том, что совместна*! инкубация клеточной массы крови с антибиотиками в присут­ствии АТФ приводит к увеличению связывания препарата с клетками крови, повы­шению функциональной активности лейкоцитов. Данные результаты позволили сделать предположение о возможности использования реинфузии аутогенной кле­точной массы крови после инкубации с антибиотиками для лечения ГВЗПМ с це­лью повышения концентрации антибиотика в очаге гнойного воспаления.

6.2.