Состояние кроветворения

Одним из существенных показателей оценки безвредности ле­карственного средства является состояние периферической крови. Как показывает анализ литературы, наиболее частым осложнением при применении лекарств является агранулоцитоз.

Другим грозным осложнением при применении некоторых лекарст­венных препаратов является развитие апластической анемии, особенно под действием цитостатиков. Экспериментальное исследование на жи­вотных при изучении хронической токсичности соединений с потенци­альной противоопухолевой активностью позволяет предсказать это свойство препарата.

Эритроциты являются важнейшим звеном в осуществлении нор­мальной жизнедеятельности органов и тканей. За 4 мес. своего суще­ствования, проходя более 200 км, они непрерывно участвуют в пре­вращениях гемоглобина; интересной особенностью эритроцитов явля­ется также их свойство изменять форму в зависимости от размеров со­судов.

В хронических токсикологических экспериментах очень важно наря­ду с подсчетом количества эритроцитов обращать внимание на их со­стояние (величина, форма, объем), поскольку отклонения в данных по­казателях может быть одним из признаков развивающейся интоксика­ции.

При изучении токсичности лекарственных препаратов, предназ­наченных для внутривенного введения, важную информацию дает оценка резистентности эритроцитов.

Анемия может возникнуть в результате генетических особенностей обмена, иммунологического или другого воздействия препарата на ко­стный мозг. Для оценки состояния костного мозга наряду с миелограм- мой целесообразно производить подсчет абсолютного количества ядро­содержащих клеток в единице объема или веса костномозговой ткани.

Не менее важным при оценке гомеостаза экспериментальных живот­ных является исследование свертывающей системы крови. Тромбоэла­стография - метод определения свертывания крови, отражающий весь процесс свертывания в целом, - от появления первых нитей фибрина до конечной фазы (фибринолиза), и характеризующий качество сгустка; он позволяет в хроническом токсикологическом эксперименте проводить наблюдение за влиянием лекарственного препарата на то или иное зве­но в сложнейшем механизме свертывания крови. Этот метод не исклю­чает и другие методы, широко используемые в гематологии (подсчет тромбоцитов, определение их агрегационной активности, времени свер­тывания крови и т.д.). Holmes [221] предлагает проводить исследования в три фазы. В 1-й фазе токсикологических исследований при оценке безопасности новых лекарственных средств в остром опыте на живот­ных выявлять влияние лекарственного средства на уровень тромбоци­тов в периферической крови и на их агрегационную активность. 2-я фа­за токсикологических исследований должна включать изучение токси­ческого эффекта лекарственного средства в сравнении с действием дру­гих хорошо изученных препаратов, а также детальное исследование стимулирующего (или угнетающего) влияния на функции тромбоцитов в опытах in vitro. В 3-й фазе доклинического изучения лекарственных средств результаты, полученные во время проведения 1-й и 2-й фаз ток­сикологических исследований, подвергаются дальнейшему углублен­ному изучению.

Наши собственные исследования показывают необходимость изуче­ния состояния свертывающей системы крови. На примере изучения ан­тиоксиданта эмоксипина можно продемонстрировать подход к проведе-

нию таких исследований при изучении хронической токсичности лекар­ственных средств [70].

Из литературы известно, что ингибиторы радикальных процессов влияют на систему крови и агрегацию тромбоцитов [145].

Интересно отметить, что, несмотря на продолжение введения эмок­сипина показатели снижения коагуляционных свойств крови оставались прежними, т.е. ухудшения состояния этой системы не наблюдалось. При этом у животных не было отмечено кровоизлияний ни в одном ор­гане и даже в месте введения препарата внутримышечно или подкожно.

У кроликов при ретробульбарном применении эмоксипин удлинял время свертывания крови, начиная с дозы 5 мг/кг. Так, у контрольных животных время свертывания составляло Г15", а у кроликов, получав­ших эмоксипин, 2Т9"-=-2'31". Показатели тромбоэластограммы свиде­тельствовали об увеличении времени всех стадий тромбообразования.

Увеличение времени тромбообразования, наблюдающееся у всех ви­дов экспериментальных животных при парентеральном введении эмок­сипина, можно объяснить наличием у препарата свойств ингибировать агрегацию тромбоцитов, а также способностью тормозить полимериза­цию фибрина, замедляя при этом переход фибрина-мономера в фибрин- полимер.

Указанный выше эффект не проявлялся у животных при введении им эмоксипина внутрь в течение 6 мес. в высоких дозах (10, 20 и 50 мг/кг), а также при пероральном применении в дозе 100 мг/кг в течение 2 мес. При столь длительном ежедневном применении эмоксипина у экспери­ментальных животных не отмечено каких-либо существенных измене­ний системы гемостаза.

Отсутствие влияния на коагулограмму было отмечено нами и при длительном (6 мес.) пероральном введении крысам арбидола [74], обла­дающего антиоксидантными свойствами [32] и способностью ингиби­ровать агрегацию тромбоцитов в опытах in vitro [77]. По-видимому, это связано с "эффектом первого прохождения" препаратов при поступле­нии их в организм через желудочно-кишечный тракт, когда они сначала поступают через v.porta в печень, а затем в системный кровоток.

Таким образом, оценка состояния периферической крови при изуче­нии хронической токсичности новых фармакологических веществ на животных является одним из важнейших исследований их безопасно­сти.

Минимальный перечень тестов при оценке состояния перифе­рической крови животных в хронических токсикологических экспе­риментах, рекомендованный Минздравом России, сводится к следу­ющему [113]:

- Количество эритроцитов в крови

- Количество ретикулоцитов в крови

- Количество тромбоцитов в крови

- Количество лейкоцитов в крови

- Лейкоцитарная формула

- Количество гемоглобина

- Гематокрит

- Скорость свертывания крови

- Резистентность эритроцитов.

2.2.2.6.