Методы исследования

Диагноз ВИЧ-инфекции устанавливали на основании общепринятых клинических, эпидемиологических и лабораторных данных. Для определения вирус специфических антител в сыворотке периферической крови использовали методы иммуноферментного анализа на тест-системах «ВИЧ-1, ВИЧ-2, ИФА-Авиценна» фирмы «Авиценна», Россия и «Комби Бест анти ВИЧ1+2» фирмы «Вектор-Бест», Россия и иммунного блоттинга в

соответствии с прилагаемыми к тест-системам инструкциями (New Lav Blot 1, Bio Rad, Франция).

Вирусную нагрузку (количество копий РНК ВИЧ в 1 мл плазмы крови) определяли методом ПЦР (Ампли Сенс ВИЧ Монитор, г. Москва).

Диагноз вирусный гепатит С подтверждали определением в сыворотке крови больных анти-HCV класса JgM, IgG методом ИФА, вирусный гепатит В подтверждали определением HBs антигена, анти НВсог Ig М, Ig G.

Исследование фенотипа лимфоцитов и опсонофагоцитарной системы (ОФС) проводилось в иммунологической лаборатории Республиканского Центра по профилактике и борьбе со СПИД М3 Республики Татарстан.

Для исследования иммунного статуса больных осуществляли забор венозной крови из локтевой вены натощак в утренние часы. В работе использовалась гепаринизированная кровь (12-15 ЕД гепарина на 1 мл крови) и цельная венозная кровь. Забор крови проводили в пробирки «Vacutainer» («BD»).

Иммунофенотипирование лимфоцитов. Двухцветное маркирование лимфоцитов проводили в цельной крови в прямой реакции иммунофлуоресценции с мкАТ фирмы «Becton Dickinson» (США). Была использована панель IMK Plus (CD3, CD4, CD8, CD16/56, CD19, CD3/HLA- DR). Лизирование эритроцитов проводили раствором «FACS Lysing Solution» (Becton Dickinson, USA) после окрашивания клеток мкАТ.

Учет реакции иммунофлуоресценции проводили на проточном цитофлуориметре «FACSCalibur» (Becton Dickinson, США) в программе SimulSET. Для получения раздельного сигнала по флуоресценции FITC и РЕ устанавливали режим компенсации по FL1 и FL2 с помощью частиц «CalyBRITE» «Becton Dickinson,USA» в программе FacsCOMP.

Сывороточные иммуноглобулины А, М, G определяли методом турбидиметрии на биохимическом анализаторе ФП-901М по методике Т.И. Лукичевой и др. (1991), Н.М.Кудряшовой и др. (1993).

Комплементарную активность сыворотки крови изучали по 50% гемолизу эритроцитов барана по E.A.Kabat, М.Мауег (1977).

Циркулирующие иммунные комплексы исследовали методом преципитации полиэтиленгликолем - 6000 по M.Dygeon и др. (1977).

Фагоцитарную активность нейтрофилов (ФАН) оценивали по способности клеток захватывать St. aureus. При этом определяли ФАН - процент нейтрофилов, фагоцитировавших стафилококк, ФЧ (фагоцитарное число) - среднее число St.aureus., захваченных одной клеткой, АФП (абсолютный фагоцитарный показатель) - общее количество частиц St.aureus, фагоцитированных нейтрофилами.

Метаболическую активность нейтрофилов определяли в НСТ-тесте спонтанном и индуцированном вариантах по методу В.Н. Рас и др. (1968) в модификации М.Е. Виксмана и А.Н.Маянского (1979).

Вирусную нагрузку (количество копий РНК ВИЧ в 1 мл плазмы крови) определяли методом ПЦР.

Клинико-биохимические методы исследования. Для постановки диагноза и оценки функциональной активности печени применялся комплекс клинико-эпидемиологических и лабораторных данных: результаты функциональных проб печени (определение уровня общего билирубина и его фракций, активности аминотрансфераз, щелочной фосфотазы, тимоловой пробы, белковых фракций).

У всех пациентов многократно изучали показатели периферической крови с подсчетом форменных элементов.

При бактериальном поражении кожи посев материала из очага проводился на среды фирмы Becton Dickinson, США. При исследовании крови на гемокультуру использовались готовые среды фирмы Bio-Rad (Франция), посевы идентифицировались в аэробных и анаэробных условиях. Определение микроорганизмов до вида проводилось на микробиологическом анализаторе «iEMS-MF» (Labsistems, Финляндия) с использованием компьютерной программы «Bact» (Аналитика, Москва). При грибковых

поражениях кожи проводился соскоб с очага инфекции с последующим микроскопическим исследованием возбудителя.

флюоресцирующих иммуноглобулинов производства НИИ Гриппа РАМН г. С анкт-Петербурга.

Все больные ВИЧ-инфекцией, сочетанной с туберкулезом в условиях стационара детально обследованы с помощью клинико-рентгено-лаборатор­ных методов. Применяли как обязательные (рентгенологическое исследование, анализ мокроты на МБТ, анализ крови и мочи, туберкулиновые пробы), так и дополнительные и факультативные методы (расширенная бактериологическая диагностика, углубленное рентгенологическое исследование, исследование функции сердечно­сосудистой и дыхательной систем).

Общеклиническое обследование больных включало в себя сбор анамнеза болезни и жизни больного, а также использование физикальных методов. В анамнезе болезни большое внимание уделяли сведениям о времени начала заболевания, первых симптомах, остро или постепенно манифестирующих начало болезни. В каждом случае обращали внимание на возможный контакт с больным туберкулезом. Особое значение придавали клиническим проявлениям заболеваний системы органов дыхания, началу и течению болезни, проводимой терапии с учетом ее эффективности. При физикальном исследовании больного отмечали характер перкуторных и аускультативных изменений с последующей регистрацией их в динамике.

Туберкулиновую чувствительность определяли с помощью пробы Манту с 2 ТЕ PPD.

Важное место при обследовании больных уделяли микробиологической диагностике. Всем больным при поступлении в стационар исследовали мокроту на МБТ в течение 3 дней подряд. Проводили

общий анализ мокроты, микроскопию мазка, осуществляли также поиск микобактерий с помощью люминесцетной микроскопии, использовали метод количественной оценки массивности бактериовыделения. Во всех случаях проводили посевы мокроты на плотные питательные среды Левенштейна - Иенсена и Попеску с последующим определением чувствительности выделенных культур к противотуберкулезным препаратам.

Для определения суммарных антител (IgG, IgM, IgA) к антигенам Mycobacterium Tuberculesis в сыворотке крови больного использовали двустадийный метод твердофазного иммуноферментного анализа.

Статистическая обработка данных производилась с использованием программ «MS Ехсе1-97», программы «Статис-Мед», пакета STATISTICA-99 Edition. При этом использовались следующие статистические методы: определение средних величин, тест Стьюдента, дисперсионный анализ (Anova), анализ сопряженности (%²). Достоверность изменений признавалась при вероятности ошибки р меньше или равно 0,05.

Результаты собственных исследований и их обсуждение