Приложение 16 Методы забора и бактериологического исследования материала при инфекционных заболеваниях

лизм

1.

2.Определяют возбудителей ботулизма. Обнаружение ботулинических токсинов.

Промывные воды

- при наличии в них комочков, по­следние растира­ют в стерильной ступке.

Кал (10-15 г) - растирают с двой­ным количеством физиологического раствора.

Рвотные массы

растирают с фи­зиологическим раствором в сте­рильной ступке.

Пищевые продук­ты (25-30 г) рас­тирают в стериль­ной ступке с фи­зиологическим

отобранных проб собирают в отдельную банку. Банки нумеруют, наклеивают этикетки (вид материала, от кого взят, дата сбора материала). Банки опечатывают и тщательно упаковывают. Хранить материал следует на

холоду, т. к.

при комнатной температуре ботулинически й токсин

быстро разрушается.

введения больному лечебной сыворотки).

берут равное или двойное количест­во физиологиче­ского раствора.

После растирания пробы выдержи­вают 1-1,5 часа при комнатной

температуре для экстрагирования токсина. Фильтру­ют через ватно­марлевый фильтр или центрифуги­руют.

Центрифугат каж­дой пробы крови (сыворотку или цитратную кровь) делят на две час­ти: 2/3 объема ис­пользуют для об­наружения боту­линических ток­синов; 0,8-1,0 мл этого материала вводят внутривен­но или внутри­брюшинно белым мышам. Цитрат­ную кровь вводят только внутри­

брюшинно. Для определения вида токсина ставят ре­акцию нейтрали­зации.

После - оставшу­юся 1/3 растертых проб используют для выделения бо­тулинических ми­кробов. Посевы производят на

следующие смы-

среда Тароцци,

бульон Хотинге- ра, пепсин, пеп­тонный бульон с 0,5% глюкозой (в мясных средах

обязательно нали­чие мясного или печеночного фар­ша). Перед посе­вом среды нагре­вают на кипящей водяной бане, ох­лаждают и про­изводят посев; за­тем заливают сло­ем вазелинового масла толщиной 1 см.

Микроскопия - мазки из вырос­шей культуры. Окраска специи- альная для анаэ­робов и по Граму.

Кал и

моча.

3-5 г испраж­нений поме­щают в сте­рильную ба­ночку сухую либо с гли­цериновой смесью (со­отношение 1:3); 50-100 мл мочи со­бирают в

мента заболева ния и в течение всего лихорад очного периода.

Раппопорта.

Посев - на среды Эндо, Левина,

Плоскирева, Раппопорта (в

чашках петри) и на среды накоп­ления (Кауфмана, Мюллера, магниевая, селенитовая) с

последующим пересевом на

4-5-й

день.

Посев по воз­можности пов­торяют 2-3 ра­за, это повы­шает количе­ство положи­тельных нахо­док.

В

стерильные

момента

Посев - на среды Эндо, Левина,

сульфат агаром.

Собирают в

То же.

Райта на следующ ий день, по РПГА через 2 часа.

Хенек с до­бавлением 2% сыворот­ки и 100 ЕД антибиотико в (пеницил­лин плюс

стрептомици н). Получен­ную жид­

кость цент­рифугируют.

Кровь.

Повторно.

5 дня.

На 12-14

день.

кровь берут дву­кратно в начале заболевания и в период выздоров­ления.

Ставят реакцию торможения гем­агглютинации и реакцию связыва­ния комплемента. Парные сыворот­ки исследуют для определения нара­стания антител.

пипеткой. Собранный материал помещают в стерильную, герметическ и

мазки. Окраска по Граму.

Посев - плотные части измельчают, растирают в ступ­ке с песком в рав­ном объеме физи­ологического рас­твора. Взвесь ис­следуемого мате-

10 дней.

немедленно пересылают в бактериолог ическую лаборатори ю.

среду Вильсон- Блэр, молоко,

среду Тароцци. Кровь и экссудат центрифугируют.

Для посева иссле­дуют осадок. По­сев производят на те же среды. Биологическая проба - центри- фугаты культур по 0,2 мл вводят мышам внутри­венно или внутри­брюшинно, либо морским свинкам внутрикожно. В

случае гибели мы­шей в течение 1-х суток или появле­ния некроза кожи у морских свинок ставят реакцию

нейтрализации (на мышах или мор­ских свинках).

48 часов.

прямой кишки.

Посев - на асцит- агар и среду Бейли непосредственно после забора

материала.

Через 24­48 часов.

материала не должны спринцеваться

5-6 мл берут из локтевой вены в

стерильную пробирку.

С 3-й

недели.

Серологическое исследование - реакция связывания комплемента.

На следующ ий день.

Кровь.

Сбор мате­риала можно производить не дожида­ясь дефека­ции, с помо­щью сте­

рильного ректального тампона, вводя его в кишку на 6-8 см, или с по­мощью алю­миниевой петли.

повторн о на

протяже нии заболева ния.

С 9-10­го дня.

желчный бульон ср. Плоскирева с антибиотиком.

Серологическая реакция - реакция агглютинации (дизентерийный Видаль), реакция

На следующ ий день.

Реакция агглютинации считается по­ложительной для шигелл

для шигелл

Зонне, Гри­

горьева-Шига и Ньюкастл - в разведении 1:100.

ртом боль­ного в мо­мент кашля;

2.Для взятия слизи там­пон извлека­ют из про­бирки и сги­бают о край пробирки под углом 110-120.

Язык фикси­руют шпате­лем и согну­тую часть

тампона проводят по задней стенке глотки 2-3 раза.

При взятии там­поном посев про­изводят на уголь- но-казеиновую среду, непосред­ственно после за­бора. Тампон тща­тельно втирают в поверхность сре­ды (для подавле­ния роста сопут­ствующей микро­флоры перед по­севом поверх­

ность среды оро­шают раствором пеницилина со­

держащим 7,5 ЕД пенициллина в 1 мл). Микроспория - мазки из вырос­шей культуры.

Окраска по

Граму.

ледние порции. Не­сколько граммов со­бирают в

пробирку с физиологиче ским раст­

вором или с глицериново й смесью.

дня.

Эндо,

Плоскирева,

Левина.

грудных детей - материал

собирают с

пеленок.

Агглютинация - проводят отбор колоний пробной агглютинацией на стекле со смесью ОВ-сывороток. Агглютинирующи еся колонии отсе­вают на мясо­пептонный агар.

локтевой вены стерильным шприцем.

С начала заболева ния.

С 8-9

менее 10 раздав­ленных капель. Посев - 3-4 мл крови засевают на водопроводную воду с добавле­нием кроличьей сыворотки. Выра­щивают при тем­пературе 22-30⁰С. Биологическая проба - вирулент­ность культуры

определяют на

белых мышах. Биологическая проба - 3-4 мл крови дефибрини- руют и заражают животных (морс­ких свинок). Зара­жение внутри­

брюшинно, под­кожно либо внут­ривенно. Серологические

через 8-10 дней - 1 месяц.

Через 6­10 дней.

На

Серологическу

Ликвор.

4-6 мл.

берут в

стерильную посуду.

В

период

7-8 дня до 3

месяцев.

Посев - на

водопроводную воду с

добавлением кроличьей сыворотки.

Через 8­10 дней.

повторяют через 3-5 дней. Положительно й считается

реакция только титра.

Токсигенность -

пневмо­кокками

Кровь (при по­дозрении на сепсис). Мокрота, слизь из носоглотк и.

берут из

вены стерильным шприцем.

То же.

сахарный бульон (соотношение 1:10).

Посев - готовят взвесь исследуе­мого материала в 1 мл 1% стериль­ной пептонной во­ды. 1 каплю взве­си засевают на чашки Петри, с кровяным агаром (5-7% дефибрини- рованной кро­

личьей крови). Микроскопия - мазки. Окраска по Граму.

день.

На 2-3

день.

5-10 мл

крови, стерильно взятой из

локтевой вены.

Со второй недели.

внутрибрюшинно морской свинке. Эмульсией из

селезенки морской свинки заражают куриные эмбрионы. Серологические реакции:

1.Реакция агглютинации с риккетсиями Бернета;

2.Реакция связывания комплемента.

Положительно й является

реакция с

нарастанием титра.

обезжиренно е предмет­ное стекло. Стекло кла-

Не зависит

руют в 96⁰эти­ловом спирту 15 минут, окрашива­ют краской Рома­новского;

капле накло­ненное под углом 45

шлифованно е стекло. По­сле того как капля расте­кается, шли­фованное стекло быст­ро подвига­ют вперед. Приготовлен ие толстой капли: на

стекле при­готовляют мазок, дают упасть еще капле крови. Капля рав­номерно растекается образуя круг.

приступ

а.

То же.

окрашивают по Романовскому.

охлаждения и как можно быстрее подвергают исследовани

дня.

разведенным фуксином (по

Пфейфферу). Посев - часть полученного осадка засевают на 2-3 чашки

Через 24­48 часов.

Берут при помощи стерильного ватного там­пона, укреп­ленного на металлическ ой проволо­ке и изогну­того (перед введением) под углом 45⁰.

Тампон ос­торожно, не задевая язы­ка и минда­лин, вводят за мягкое не­бо. Слизь

снимают с задней стен­ки глотки и осторожно выводят тампон.

при подозре нии на бацилло носител ьство.

асцитного агара.

Микроскопия - мазки из взятой слизи. Окраска по Граму.

Посев - тампон со слизью опускают в пробирку с небольшим количеством бульона.

Несколько капель этого бульона

засевают на 2-3 чашки севороточ- ного агара с анти­биотиком.

Мазки из вырос­шей культуры. При наличии ме­нингококков про­водят типирова- ние их.

Бактериологич еское исследование обязательно.

При исследовании на наличие

менингококка забранный материал предохраняют от охлаждения.

папул, везикул, пустул, корки и чешуйки).

кость из пу­зырька не выступает, то скальпе­лем, пером или концом пастеровско

материала делают мазки на

обезжиренных предметных стеклах. Окраска по Морозову.

соблюдением предосторожн ости, необходимых при работе с особо опасными инфекциями.

осторожно соскабливаю т мягкую

пульпу узел­ка. Можно

так же сде­лать соскоб со дна пов­режденного пузырька. Собранный материал помещают в стерильные пробирки, плотно зак­рывают пробками, заливают парафином либо закле­ивают лей­копластырем Собирают стерильным тампоном в пробирку.

2-3 мл берут из локтевой вены.

С 7-9-го дня.

заражение куриных эмбрионов и

культуры ткани.

То же.

Серологические реакции - реакция связывания комп­лемента и реакция торможения гемм- агглютинации. Биологическая проба - иссле­дуемый материал (одна капля) вво­дится в скарифи­цированную конъ­юнктиву глаза

кролика. Через

36-48 часов по линии надреза по­являются мелкие прозрачные пу­

зырьки.

На

следующ ий день.

Через 36­

48 часов.

часов.

Для выявления нарастания титров геммаглютини нов реакцию повторяют.

верхности пред­плечья.

среду с висмут­сульфат агаром. Засеянный мате­риал растирают шпателем.

Испражне

центрифугир уют.

4-6 г соби-

массы.

Посев - проводят

рильными стеклянным и трубочка­ми или дере­вянными шпателями и помещают в стерильные пробирки с глицериново й смесью

(1:3) (отби­рают пос­

ледние пор­ции испраж­нений).

помещают в стерильную посуду, центрифугир уют.

культур 5-10 мл берут

стерильно из локтевой вены.

сальмонелл (по типу реакции

Видаля).

3.Пищевы е отравлени я, вызванны е клострид иями перфинге нса.

возможност и быстро

доставляют в лаборатори ю.

бульон (с 6,4% раствором хлори­да натрия) и са­харный бульон (с 1% раствором

глюкозы).

Микроскопия - мазки из вырос­шей культуры.

Окраска по

Граму. При нали­чии стафилококка ставят пробу на плазмокоагуляци ю и проверяют гемолитические его свойства. Биологическая проба - прямое исследование на наличие токсина: полученный ма­териал растирают в ступке с равным или двойным ко­личеством физио­логического раст­вора. Центрифугируют. 0,5 и 0,1 мл фильтрата вводят внутривенно или внутрибрюшинно двум парам мы­шей (весом 22-24 г). Если в течение 3-4 часов появля­ется некроз в мес­те введения либо

менее 5 мм в диаметре.

В третьем

Романовскому.

1.реакция связывания комплемента;

2.реакция с

красителем Себина-Фельдма- на. Принцип реак­ции: цитоплазма токсоплазм при воздействии на

них специфичес­ких антител те- ряяют способ­ность окраши­

ваться метилено­вым синим;

3.реакция

гемагглютинации. Биологическая проба - 0,5 мл исследуемого материала вводят подкожно или

внутрибрюшинно мышам. Гибель

мышей наступает на 7-10-й день. Аллергическая проба - 0,1 мл аллергена (токсо­плазмин) вводят строго внутри­

кожно с наружной стороны плеча.

Положительная реакция характе­ризуется инфиль­тратом не менее 10 мм, который не исчезает и не уменьшается в

течении 48 часов.

На 7-10 день.

Через 48 часов.

Берут сте-

Окраска по Цилю- Нильсену. Плевральная

методов.

Основными сред­ствами для выра­щивания туберку­лезных микобак­терий служат:

среда Петраньяни, среда Паловского (глицериновый картофель), яич­ная среда и др. Биологическая проба - ставят на морских свинках. Материал вводят внутрикожно в

паховую область. Если испытуемый материал содер­жит смешанную бактериальную флору, то его сле­дует предвари­тельно обрабо­тать. Материал

вводят в коли­честве 1-2 мл. Смерть от генера­лизованного про­цесса наступает через 2-3 месяца. Для выявления

специфических изменений можно умертвить свинку через 2-4 недели. Реакция Манту - строго в кожу вводят 0,1 мл ту­беркулина. Поло­жительная реак­ция характе-ризу- ется гиперемией и

Мыши погибают на 3-5-е сутки, морские свинки - на 6-8-е сутки. Наблюдение до 15 дней.

Аллергическая проба - на ладон­ной стороне пред­плечья стериль­ным шприцем

строго внутри­

кожно вводят 0,1 мл тулярина (в 1 мл тулярина со­держится 100 млн. микробных тел). При положитель­ной реакции ги­перемия и ин­фильтрат появля­ются через 24 часа.

48 часов.

собранного материала 10-20 мл

металлическ им шпате­лем либо ло­жечкой пе­реносят в

стеклянные баночки. Ба­ночки зак­рывают пробками, заливают па­рафином, покрывают двумя сло­ями перга­

ментной бу­маги, обвя­зывая каж-

плотную часть

рвотных масс

растирают тонким слоем на

предметном стекле. Окраска по Граму.

Посев - на 1% пептонную воду. Для накопления холерных вибри­онов применяют теллурит-калие- вую среду.

Одновременно материал засева­ют на щелочной, щелочно-солевой агар, среду Дьедо- не и др.

При подозрении на холеру необходимо пользоваться ускоренными и вспомогательн ыми методами исследования.

Кровь (парные сыворотк и).

отдельно.

Воду и

жидкие пищевые продукты берут в

количестве 1000 мл.

Плотные пищевые продукты в количестве 200 г.

Расставляют стеклянные мухоловки с 1% пептон­ной водой + 1% сахара (ставят в

термостат на 5-8 часов). 1-5 мл берут из пальца.

5-7-й день (1­й через 3-5 ней заболева ния, 2-й через 7­10 дней).

общей схеме.

2.плотный мате­риал: для посева берут кусочки из разных мест, сое­диняют их в

среднюю пробу (5-10 г) и иссле­дуют по общей схеме.

Исследование ведут по общей схеме.

Серологическая реакция - по типу реакции Ведаля. Ставят в разве­дениях 1:20,1:40, 1:80, 1:160.

1:80. Реакция эта применя­ется с целью ретроспективн ого диагноза. При исследо­вании на холе­ру материал с отобранными пробами укла­дывают в ме­таллическую посуду, пере-

щают в дере­вянные ящики. На крышке пи­шут«осторо­жно» пломби­руют. К ящи­ку прилагают сопроводитель ный документ со всеми дан­ными и под­писью врача. При подозре­нии на холеру исследования проводят с со­блюдением мер, необхо­димых при ра­боте с особо опасными ин­фекциями.

2.пунктат из карбунку ла.

Пораженный участок и

окружение его предва­рительно де­зинфицирую т спиртом. Иглу вводят у края язвы или пустулы и, продвигая ее к сере­дине,наби­раютмате­риал.

Посев - на мясо­пептонный агар, кровяной агар, на агар с генциан- фиолетовым и

сульфатом, на 2% глицериновый агар. Температур­ный оптимум для выращивания чумных микробов

Окончате льно через 48 часов.

Шприц дол­женбыть хо­рошоприг­нан. Посуда до забора мате­риалатщате­льнопрове­рена. После забора мате­риала пробки должны быть запарафирован ы или оберну­ты целлофа­номи завяза-

предела 28-30⁰.

отдельно на­клеивают эти­кетку. Мазок подписывают до нанесения материала.

2. блох грызу-

4. в отдельных случаях воздух

1. По-

3

недели.

Кок­саки

материала проводят так же.

То же.

вируса пользуются новорожденными белыми мышами. Серологические реакции - ставят­ся те же, что и при полиомиели­те, но со специфи­ческими антиге­нами. Для выделе­ния вируса поль­зуются культурой ткани.

Синномоз говая жидкость.

Кровь.

1-2 мл лик­вора, полу­ченного пун­кцией, выли­вают в сте­рильную пробирку.

5-8 мл берут стерильно из локтевой вены.

3 недели.

С начала заболева ния.

То же.

Серологические реакции:

1. реакция связы­вания комплемен­та;

2. реакция нейтра­лизации антител.

день.

То же.

достигают наиболее высоких титров через 2 месяца.