2 Бактериальные инфекции

2.1 Материал на сибирскую язву исследуют путем микроскопии мазков, посева на обычные среды (МПБ, МПА) и заражения лабораторных животных; при необходимости ставят реакцию преципитации.

Обязательно мазки окрашивают по Граму и на капсулы. По результатам микроскопического исследования дают немедленно предварительное заключение.

Идентификацию выделенной культуры проводят по характеру роста, морфологии микроба, капсулообразованию. В сомнительных случаях определяют подвижность, гемолитические свойства, феномен «ожерелья» и проводят фаготипирование, а также заражают лабораторных животных. Срок бактериологического исследования — 1-3 дня.

Биологическое исследование проводят путем подкожного заражения двух белых мышей или двух морских свинок суспензией из исходного материала в дозе соответственно по 0,1-0,2 и по 0,5-1 мл. Срок наблюдения до 10 дней.

Реакцию преципитации ставят в соответствии с действующими техническими нормативными правовыми актами (ТНПА). Экстрагирование проводят холодным и горячим способами. Свежий материал перед экстрагированием выдерживают 18-20 часов в термостате.

Окончательное заключение дают на основании идентификации выделенной чистой культуры и результат биологического исследования или в случае исследования загнившего материала при наличии положительной реакции преципитации.

2.2. Диагноз на эмфизематозный карбункул крупного рогатого скота (овец) в лаборатории ставят на основании результатов бактериологического и биологического исследований. Окончательный диагноз в хозяйстве устанавливают с учетом клинических и эпизоотологических данных и патологоанатомических изменений.

Исследования проводят путем микроскопии мазков (окраска по Граму или по Муромцеву), высевов из мышц и органов на среду Китт-Тароцци, МПБ и МПА. Культуру идентифицируют по характеру роста на глюкозо-кровяном агаре, морфологии микроба и патологоанатомическим изменениям у морских свинок (не менее двух), заражаемых одновременно с посевами суспензией из мышц подкожно в области живота, в дозе 1 мл.

Срок лабораторного исследования до 8 дней.

2.3 При исследовании материала на злокачественный отек. Материал исследуют микроскопией мазков (окрашенных по Граму или Муромцеву), бактериологическим и биологическим методами. Посевы им мышц и органон проводят на среду Китт-Тароцци, МПБ и МПА. Идентификацию культур проводят, как указано в пункте 2.2.

Одновременно с посевами заражают двух морских свинок подкожно в области живота суспензией из патологического материала и дозе 1 мл. Срок исследования до 8 дней.

2.4 Исследование на брадзот овец проводят путем микроскопии мазков (окрашенных по Граму или Муромцеву), бактериологического и биологического исследований.

Посевы из органов, отечных инфильтратов подкожной клетчатки и подслизистой оболочки сычуга делают на среду Китт-Тароцци, МПБ и МПА.

Биологическое исследование проводят на двух морских свинках, которых заражают суспензией из материала подкожно в области живота в дозе 0,5-1 мл.

Культуру возбудителей идентифицируют, как указано в пункте 2.2.

Окончательный диагноз в хозяйстве ставят на основании результатов исследований с учетом эпизоотологии, клиники заболевания и патологоанатомических данных.

Срок исследования до 8 дней.

2.5 Лабораторный диагноз на инфекционную энтеротоксемию устанавливают на основании обнаружения токсина в содержимом тонкого отдела кишечника или выделения культуры возбудителя. Окончательный диагноз определяют с учетом клинической картины и патологоанатомических изменений, а также сезонности заболевания.

Для обнаружения токсина в содержимом тонкого отдела кишечника вводят внутривенно или внутрибрюшинно фильтрат содержимого двум белым мышам или внутривенно одному кролику в соответствии с действующими ТНПА. Определение типа токсина при помощи типоспецифических сывороток проводят, руководствуясь действующими ТНПА.

Исследование проводят также путем выделения культуры возбудителя с последующей её типизацией. Посевы проводят из содержимого кишечника и паренхиматозных органов на среду Китт-Тароцци, МПА и МПБ.

Срок исследования до 8 дней.

2.6 Исследование на анаэробную дизентерию ягнят проводят, как и при диагностике инфекционной энтеротоксемии овец (п.2.5).

Окончательный диагноз ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных с учетом возраста (1-5, редко 7-14 дней) животных.

Срок исследования до 8 дней.

2.7 Диагноз на некробактериоз в лаборатории устанавливают на основании микроскопического, бактериологического и биологического исследований. В хозяйстве окончательный диагноз устанавливают также с учетом клинических признаков и патологоанатомических изменений.

На основании данных микроскопии мазков, окрашенных по Муромцеву, Романовскому-Гимза или синькой Леффлера, ставят предварительный диагноз.

Материал высевают на среду Китт-Тароцци.

Для биологического исследования заражают одного кролика под кожу уха в дозе 0,5-1 мл взвесью материала. Биопроба считается положительной при развитии у кролика некротического очага на месте введения взвеси и обнаружении в мазках из него типичных микробов.

Срок исследования до 10 дней.

2.8 Диагноз на столбняк ставят на основании результатов микроскопического, бактериологического и биологического исследований с учетом клинической картины.

Мазки из материала окрашивают по Граму.

Посевы из материала делают на среду Китт-Тароцци в двойном количестве пробирок с обязательным прогреванием половины засеянных пробирок при 80°С 20 минут.

Культуру идентифицируют по морфологическим свойствам, характеру роста на глюкозо-кровяном агаре и токсинообразованию. Токсичность культуры проверяют путем заражения двух белых мышей или двух морских свинок подкожно в заднюю лапу фильтратом 8-10-суточной культуры в дозе 0,3-0,5 мл. О наличии токсина судят по клинической картине.

Заражение лабораторных животных патологическим материалом проводят так же, как и культурой.

Срок исследования до 14 дней.

2.9 Диагноз на ботулизм ставят на основании бактериологического и биологического исследований.

Материал исследуют одновременно на обнаружение ботулинических токсинов и выделение возбудителя.

Для обнаружения токсина его экстрагируют из материала физиологическим раствором. Фильтрат или центрифугат экстракта вводят в дозе 0,5-0,8 мл внутрибрюшинно или внутривенно 3-4 белым мышам или 2 морским свинкам тот же материал после прогревания при 100°С в течение 30 минут. Тип токсина определяют в реакции нейтрализации с типоспецифическими сыворотками.

Для обнаружения возбудителя ботулизма проводят посев на среду Китт-Тароцци в два флакона из каждого материала. Один флакон сразу после посева прогревают при 80°С 20 минут.

Культуры идентифицируют по характеру роста на глюкозо-кровяном агаре и токсинообразованию. Наличие токсина и его тип определяют в культуре 4-8-дневного роста, как и при исследовании материала.

Срок исследования до 10 дней.

2.10 При подозрении на туберкулез животных исследование проводят микроскопическим, бактериологическим, серологическим и биологическим методами.

Микроскопию мазков из материала проводят световым (окраска по Циль-Нильсену) или люминесцентным методами.

Для посевов применяют среды Петраньяни или Гельберга (по 5-6 пробирок).

Культуры дифференцируют от кислотоустойчивых сапрофитов и атипичных микобактерий по культуральным свойствам; при необходимости определяют патогенность для лабораторных животных.

Биологический метод применяют для диагностических целей и определения типа возбудителя.

Обязательное биологическое исследование проводят:

- при исследовании материала от убитых реагировавших на туберкулин животных из ранее благополучных хозяйств в случаях отсутствия специфических патологоанатомических туберкулезных изменений (на 2 морских свинках или 2 кроликах, и зависимости от какого вида животного исследуют материал);

- для определения типа возбудителя во вновь выявленных неблагополучных хозяйствах (на 2 морских свинках и 2 кроликах).

Морских свинок заражают подкожно в области паха,. кроликов — внутривенно суспензией патологического материала из расчета 1 г исследуемого материала, культурой — в дозе 1 мг бактериальной массы. Срок наблюдения 3 месяца.

Лабораторный диагноз устанавливают на основании результатов бактериологического и биологического исследований.

Срок бактериологического и биологического исследований до 3 месяцев.

2.11 При подозрении на туберкулез птиц материал исследуют патологоанатомическим, микроскопическим и бактериологическим методами.

Диагноз на туберкулез ставят при наличии характерных патологоанатомических изменений и обнаружении кислотоустойчивых микобактерий в мазках из органов, окрашенных по Циль-Нильсену.

При отсутствии патологоанатомических изменений, свойственных туберкулезу, проводят полное бактериологическое исследование, как указано в пункте 2.10.

Срок микроскопического исследования до 2 дней.

Срок бактериологического исследования до 1 месяца.

2.12 При паратуберкулезе исследование проводят микроскопическим и серологическим методами.

Микроскопическое исследование проводят световым (с окраской мазков по Циль-Нильсену) или люминесцентным методами.

Серологическое исследование сывороток крови проводят по РСК.

Окончательный диагноз ставят на основании результатов микроскопических и серологических исследований с учетом клинических, аллергических и эпизоотологических данных.

Срок микроскопического исследования до 3 дней.

Срок серологического исследования до 3 дней.

2.13 Диагностику бруцеллеза проводят путем серологического исследования сывороток крови животных (РА, РСК, РДСК). В установленных действующими ТНПА случаях применяют кольцевую реакцию с молоком.

При наличии животных с подозрительными на бруцеллез клиническими признаками проводят микроскопическое, бактериологическое и в необходимых случаях биологическое исследование.

Мазки из патологического материала окрашивают по Граму и одним из специальных методов (по Козловскому, Шуляку-Шину и др.).

Посевы из плодов (содержимого желудка, грудной и брюшной полостей, печени и селезенки) делают на печеночно-глюкозо-глицериновый бульон и агар (2-3 пробирки) или сывороточно-глюкозный, или картофельный агар (рН сред 6,8-7,0), или сухой питательный агар с добавлением глицерина и глюкозы. Одновременно для исключения других инфекционных болезней делают посевы на МПА, МПБ, ПЖА и среду Петровского. При исследовании других материалов высев делают на плотные среды в чашках (3-4).

Выделенные культуры бруцелл идентифицируют на основании тинкториальных, морфологических и культуральных признаков, а также по РА с позитивной сывороткой на стекле.

Биологические исследования проводят на одной морской свинке, предварительно проверенной на бруцеллез по РА. Суспензию из материала вводят подкожно в дозе 1-2 мл. Через 10-20-30 дней сыворотку крови зараженных животных исследуют в РА в разведении 1:10-1:80.

При исследовании материала от животных, убитых с диагностической целью, проведение биопробы обязательно.

Сроки отправки ответов:

- при серологических исследованиях до 4 дней;

- при бактериологических исследованиях до 1 месяца;

- при биологических исследованиях до 2 месяцев.

2.14. Лабораторная диагностика инфекционного эпидидимита основывается на бактериологическом и серологическом исследованиях.

Посевы проводят на 2-3 пробирки (чашки) с плотным печеночно-сывороточным или печеночно-амидопептидным агаром и 2-3 пробирки с полужидким сывороточным или амидопептидным агаром. Полученные первичные культуры подвергают серологической идентификации.

Серологические исследования сывороток крови проводят в РДСК.

Срок бактериологического исследования до 40 дней, серологического — до 6 дней.

2.15 Исследования на вибриоз проводят микроскопическим, бактериологическим и серологическим методами.

При исследовании абортированных плодов посевы делают из содержимого сычуга, легкого, печени, головного мозга, измененных участков плаценты и амниотической жидкости в 5 пробирок ПЖА из каждого органа. Сперму, слизь и секрет высевают в 5 пробирок ПЖА (из каждой пробы). Мазки из материала окрашивают фуксином Циля в разведении 1:5 или флуоресцирующими сыворотками.

Дифференциацию патогенных от непатогенных вибрионов проводят при помощи агглютинирующих моноспецифических сывороток, люминесцентной микроскопии, по культуральным (рост на средах с 3,5% хлорида натрия, с 4% желчи) и биохимическим (образование сероводорода и каталазы) свойствам.

Серологические исследования проводят методом постановки РА с влагалищной слизью.

Диагноз устанавливают на основании клинико-эпизоотологических данных и выделении культуры возбудителя.

Срои бактериологического исследования до 10 дней.

Срок серологического исследования до 4 дней.

2.16 Прижизненную диагностику сапа у лошадей проводят на основе учета результатов маллеинизации и клинических признаков. В лаборатории проводят серологическое исследование крови в РСК и гистологическое — патологических материалов.

Срок серологического исследования до 10 дней, гистологического — до 5 дней.

2.17 При подозрении на лептоспироз исследования проводят микроскопическим, гистологическим, серологическим и при необходимости бактериологическим и биологическим методами.

Микроскопируют лептоспир живыми и раздавленной капле при увеличении в 200-280 раз с конденсором «темное поле».

Бактериологически исследуют кровь, печень, почки и мочу. Из каждого материала засевают 2-3 пробирки с одной из сывороточных сред (Любашенко, Терских и др.) или с альбуминовой средой.

Культуру идентифицируют по морфологическим свойствам, серотип определяют с помощью лептоспирозных агглютинирующих сывороток.

Биопробу ставят па двух 8-10-дневных крольчатах или двух 3-4-недельных золотистых хомяках, которых заражают суспензией из органов, кровью или мочой внутрибрюшинно в дозе 2,0-2,5 мл крольчатам или 0,5-1 мл хомякам. Животных убивают (одно на 4-й, другое на 12-14-й день) с последующим бактериологическим исследованием.

Для гистологического исследования срезы окрашивают гематоксилин-эозином, а дли обнаружения лептоспир — методом импрегнации, серебром по Левадити.

Серологические исследования проводят в реакции микроагглютинации не менее как с семью серотипами лептоспир.

Срок серологического исследования до 4 дней, микроскопического — 1 сутки, гистологического — до 15 дней, бактериологического и биологического — от 20 до 50 дней.

2.18. Исследования при подозрении на рожу свиней проводят микроскопическим, бактериологическим и при необходимости биологическим методами.

Мазки окрашивают по Граму, а также флуоресцирующими сыворотками.

Высевы из органов проводят на МПБ или бульон Хоттингера и МПА (рН 7,4-7,8).

Идентификацию культуры проводят на основании культуральных, морфологических, биохимических (пробы на каталазу, сероводород, рост на индикаторных средах) свойств, а также с помощью флуоресцирующих сывороток.

При биологическом исследовании суспензией из материала заражают 2 белых мышей подкожно в дозе 0,1-0,2 мл или 2 голубей — внутримышечно в дозе 0,2-0,3 мл.

Лабораторный диагноз ставят на основании микроскопического и бактериологического исследований.

Предварительный ответ дают через сутки, окончательный — до 7 дней.

2.19 Исследования на листериоз проводят микроскопическим, бактериологическим, биологическим и серологическим методами.

Мазки окрашивают по Граму или флуоресцирующими сыворотками.

Из материала делают обильные множественные посевы на МПБ, МПА или МППБ и МППА с добавлением 1% глюкозы и 2-3% глицерина.

Идентификацию культуры проводят на основании культуральных, морфологических, биохимических (пробы на каталазу, сероводород, рост на индикаторных средах) свойств, в РА на стекле с поливалентной листериозной сывороткой и методом иммунофлуоресценции.

Биологическую пробу на листериоз ставят на 2-3 белых мышах (весом 18 г), которых заражают подкожно суспензией из внутренних органов и головного мозга в дозе 0,3-0,5 мл.

Серологические исследования сыворотки крови проводят по РСК.

Лабораторный диагноз ставят на основании результатов бактериологического, биологического и серологического методов исследований с учетом клинико-эпизоотологических данных.

Срок бактериологического и биологического исследований до 14 дней, серологического исследования — до 4 дней.

2.20 При подозрении на пастереллез материал исследуют микроскопическим, бактериологическим и при необходимости биологическим методами.

Мазки из материала окрашивают краской Муромцева или по Романовскому-Гимза.

Посевы делают на МПБ и МПА. Идентификацию культуры проводят по кульгуральным, морфологическим, биохимическим (на средах с глюкозой, лактозой, сахарозой и маннитом) свойствам и определяют патогенность ее для лабораторных животных.

Биологическое исследование проводят на 2 белых мышах, которых заражают подкожно суспензией из материала в дозе 0,2 мл или 2 голубях (при исследовании материала от птиц) внутримышечно в дозе 0,3 мл.

Диагноз ставят на основании лабораторных исследований с учетом эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных.

Срок исследования — 5 дней.

2.21 Исследование на псевдотуберкулез овец проводят микроскопическим, бактериологическим и биологическим методами.

Мазки окрашивают по Граму и одним из методов, применяемых для выявления биполярности (см. п. 2.20).

Посевы делают на МПА и МПБ.

При биологическом исследовании заражают подкожно или внутрибрюшинно суспензией исходного материала 2-3 белых мышей или 2 морских свинок.

Диагноз на псевдотуберкулез устанавливают на основании результатов бактериологического и биологического исследований с учетом эпизоотологических и патологоанатомических данных.

Срок исследования до 1 месяца.

2.22 При подозрении на туляремию исследование проводят микроскопическим, бактериологическим и биологическим методами.

Мазки окрашивают по способу Романовского-Гимза при экспозиции 1-1,5 часа.

Посев из материала делают на желточные среды Мак-Коя или Дрожев-киной и одновременно на обычные среды.

Идентификацию свежевыделенной культуры проводят на основании морфологических и культуральных свойств, реакции агглютинации со специфической противотуляремийной сывороткой и патогенности для белых мышей и морских свинок.

Одновременно с посевами заражают 4 белых мышей или 2 морских свинок. Суспензию из патологического материала вводят подкожно или внутрибрюшинно в дозе 0,5-1,0 мл.

Диагноз ставят на основании бактериологических и биологических исследований с учетом эпизоотологических и эпидемиологических данных.

Срок исследования до 25 дней.

2.23 Лабораторную диагностику сальмонеллезов проводят микроскопическим, бактериологическим, серологическим, а при необходимости биологическим методами.

Мазки окрашивают по Граму или флуоресцирующими сыворотками.

Посевы из патологического материала проводят на МПБ, МПА и одну из элективных сред (Эндо, Плоскирева и др.); при исследовании материала от овец – на сывороточные (5-10%) или глюкозные (0,2%) агар и бульон; при исследовании фекалий — на одну из элективных сред и на среду обогащения (селенитовая, Кауфмана или Мюлера).

При идентификации культуры определяют подвижность, биохимические свойства (на средах с глюкозой, лактозой, сахарозой и маннитом; образование сероводорода и индола) и ставят реакцию агглютинации с монорецепторными О- и Н-сыворотками.

Биологическое исследование проводят на 2 белых мышах, которых заражают подкожно культурой в дозе 0,2-0,3 мл при концентрации 50-100 млн. микробных тел в 1 мл.

Серологические исследования сыворотки крови проводят в РА.

Срок бактериологического исследования до 4 дней, биологического — до 10 дней, серологического — до 4 дней.

2.24 Лабораторную диагностику колибактериоза проводят микроскопическим, бактериологическим и при необходимости биологическим методами.

Мазки окрашиваюг но Граму.

Посевы проводят на МПА, МПБ, среды Эндо или Левина из сердца, печени, желчного пузыря, почки, брыжеечных лимфатических узлов, костного и головного мозга.

Идентификацию культуры проводят по культуральным, биохимическим, серологическим и патогенным свойствам. Патогенность проверяют при внутрибрюшинном заражении 3 белых мышей (весом 15-18 г) смывом агаровой культуры в дозе 500 млн. микробных тел. Срок наблюдения 5 суток.

Положительный бактериологический диагноз при исследовании патматериала ставят в случаях: выделения чистой культуры Е. соli из крови и большинства органов; выделения чистой культуры Е. соli не менее чем из двух следующих органов: костного мозга, головного мозга, селезенки, печени, желчного пузыря, брыжеечных лимфоузлов и установления патогенности культуры, выделенной из отдельных органов.

При исследовании фекалий результат считают положительным при выделении энтеропатогенных серотипов Е. соli, вирулентных для белых мышей.

Диагноз ставят на основании эпизоотологических (массовость заболевания, очаговость, возраст животных и др.), клинических, патологоанатомических данных и результатов бактериологического исследования.

Срок исследования до 7 дней.

2.25 При подозрении на колисептицемию птиц лабораторные исследования проводят микроскопическим, бактериологическим и при необходимости биологическими методами.

Посевы из патологического материала проводят на МПБ, МПА и среду Эндо или Левина из сердца, печени, селезенки, костного и головного мозга.

Идентифицируют культуры, как указано в пункте 2.24, за исключением патогенности, которую устанавливают путем заражения 2-3 цыплят 1-2-месячнрго возраста. Цыплят заражают в воздухоносный мешок или внутрибрюшинно культурой в дозе 500 млн. микробных тел.

Диагноз ставят на основании результатов лабораторного исследования с учетом эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных. При установлении диагноза на колисептицемию необходимо исключить микоплазмоз.

Срок бактериологического исследования до 7 дней, биологического — до 20 дней.

2.26 При подозрении на диплококковую инфекцию исследования проводят микроскопическим, бактериологическим и при необходимости биологическим методами.

Мазки из материала окрашивают по Романовскому-Гимза и по Граму.

Посевы из патологического материала проводят на МПА, МПБ и в полужидкий агар. Среды готовят с прибавлением 1% глюкозы, рН сред 7,6.

Идентификацию выделенных культур проводят по морфологическим, культуральным, биохимическим (отношение к сахарам короткого пестрого ряда) свойствам, а также по патогенности для белых мышей при внутрибрюшинном заражении в дозе 0,5 мл.

Биологическое исследование проводят на 2 белых мышах (весом 10-14 г), которых заражают внутрибрюшинно суспензией из органов в дозе 0,5 мл.

Диагноз устанавливают на основании результатов лабораторных исследований с учетом клинических, эпизоотологических, патологоанатомических данных.

Срок исследования до 6 дней.

2.27 Для постановки диагноза на мыт микроскопируют не менее 3-5 окрашенных обычными красками мазков из гноя лимфатических узлов и паренхиматозных органов.

В отдельных и неясных при микроскопировании случаях делают посевы патологическою материала на обычные питательные среды с прибавлением сыворотки крови или глюкозы (рН 7,6).

Диагноз устанавливают на основании микроскопии, а в необходимых случаях — выделения культуры возбудителя и результатов биопробы (белые мыши), с учетом клинических и эпизоотологических данных.

Срок микроскопического исследования 1 сутки.

Срок бактериологического исследования до 4 суток.

2.28 Диагноз на копытную гниль овец и коз устанавливают на основании эпизоотологических и клинических данных, результатов микроскопических исследований, а в необходимых случаях — результатов биологической пробы.

Для микроскопической диагностики на предметных стеклах делают мазки-отпечатки из свежих пораженных участков основы кожи копытец и из слизи, покрывающей кожу межпальцевых щелей. Мазки окрашивают по Граму.

В случае неясных результатов микроскопии ставят биопробу на овцах (ягнятах).

Срок микроскопического исследования 1 сутки.

Срок биологического исследования от 4 суток до 3 недель.

2.29 Диагностика респираторного микоплазмоза птиц основана на данных патологоанатомического, бактериологического и биологического исследований.

Посевы делают на жидкие и плотные среды Эдварда, на МПБ и МПА.

Биологическое исследование проводят путем заражения культурой не менее 15 куриных или индюшиных эмбрионов 9-дневного возраста в аллантоисную полость в дозе 0,2 мл.

Срок бактериологического исследования до 30 дней, биологического — до 35 дней.

2.30 При подозрении на перипневмония крупного рогатого скота проводят серологические, гематологические и гистологические исследования с учетом клинико-эпизоотологических данных, патологоанатомических изменений.

В сомнительных случаях рекомендуется биопроба на телятах.

Срок серологического исследования до 3 дней, гистологического – до 10 дней, биологического — до 120 дней.