Осаждение органическими полимерами и другими веществами
Высокомолекулярные соединения могут агрегироваться под действием различных высокомолекулярных нейтральных водорастворимых полимеров, ионов некоторых металлов и ряда других соединений.
Из полимеров для осаждения и выделения используются декстраны и полиэтиленгликоль различной степени полимеризации. Для осаждения обычно используют полиэтиленгликоль (ПЭГ) двух типов с молекулярными массами 6 000 и 20 000. Осаждение белков в растворах ПЭГ сходно с их осаждением в органических растворителях. Так, растворимость ферментов в растворах ПЭГ возрастает по мере отклонения pH от их изоэлектрической точки. Но для проведения осаждения требуются низкие концентрации ПЭГ. Полиэтиленгликоль можно добавлять в виде концентрированного (50%) водного раствора до содержания его в смеси 6-12%. Процесс можно вести при комнатной температуре, так как ПЭГ оказывает на белок стабилизирующее воздействие. Сам реактив сравнительно дешев и используется в ряде стран для осаждения ферментов в промышленных масштабах. ПЭГ труднее удалить из ферментной фракции, чем соль или органический растворитель, но поскольку он не оказывает отрицательного воздействия на белок при его дальнейшем выделении (высаливание, ионообменная хроматография, адсорбция и т. д.), его часто не удаляют совсемЕсть данные об использовании при выделении белков заряженных полимеров, например полиэлектролитов в очень низких концентрациях (от 0,05 до 0,1%). Поскольку осаждение чаще всего ведут при низких значениях pH (от 3 до 6), которые многие соединения не выдерживают, а величина положительного заряда многих ферментов очень мала, большинство ферментов плохо осаждается этими полимерами. Но ряд ферментов, такие, как лизоци, трипсин, пепсин, осаждается хорошо. Считают, что положительно заряженные полимеры, подобные ДЭАЭ-дек- страну, эффективно осаждают кислые белки при щелочных значениях pH. Осадителями ферментов могут быть соли каприловой кислоты, риванол и многие другие соединения, имеющие как гидрофобные, так и полярные свойства, но пока способы осаждения этими реагентами очень мало изучены.
Для осаждения некоторых белков можно использовать ионы металлов, с которыми белки образуют соли, имеющие пониженную растворимость. Так, для выделения р-галактозидазы из разрушенных клеток Е. coli успешно используются ионы Мп2+. После удаления ионов Мп2+ происходят полное восстановление белка и его одновременная очистка от 30-40 % сопутствующих нуклеиновых кислот. Но этот метод осаждения не получил широкого распространения из-за того, что выделение белков из образующихся солей металлов затруднено и сопровождается инактивацией и денатурацией белка.
3.6.4.
Еще по теме Осаждение органическими полимерами и другими веществами:
- Вещества, вызывающие органические повреждения нервной системы
- Осаждение высаливанием
- Осаждение путем избирательной денатурации
- Факторы, влияющие на осаждение
- Методы осаждения (седиментации).
- Осаждение белковых препаратов
- Обмен веществ и потребности организма в питательных веществах
- При органических заболеваниях артерий
- 1. Тип органического поражения мозга.
- Стабилизирующее действие тяжелой воды на органические молекулы
- Бициклические фосфор органические соединения (БЦФ) и их аналоги
- Дифференциальная диагностика функциональных и органических систолических шумов сердца у детей