Спектры флуоресценции и состав флуорофоров липофусциновых гранул ретинального пигментного эпителия кадаверных глаз в двух случаях визуализируемой абиотрофии
При посмертном осмотре глазных бокалов кадаверных глаз в 2 случаях в РПЭ были обнаружены признаки ВМД. Для сравнения с нормой относительного содер-
Зависимость относительного содержания флуорофоров/групп флуорофоров липофусциновых гранул в хлороформных экстрактах, полученных из ретинального пигментного эпителия индивидуальных кадаверных глаз без видимой патологии и с визуально наблюдаемыми
дегенеративными изменениями*
| № пика на рис. 10А | № группы на рис. 10Б | |||||||
| 1 (17-29) лет | 2 (30-39) лет | 3 (40-49) лет | 4 (50-59) лет | 5 58 лет | 6 (60-69) лет | 7 70 лет | 8 (70-79) лет | |
| 1 | 10,6±0,4 | 12,5± ,6 | 13,2± ,2 | 14,3±0,3 | 6,9 | 14,7±0,1 | 4,0 | 15,7±0,8 |
| 2-4 | 13,8±0,3 | 16,4±0,5 | 16,9±0,3 | 17,8±0,3 | 19,9 | 18,4±0,1 | 20, 7 | 19,2±0,7 |
| 5 | 2,9±0,3 | 4,2±0,3 | 4,9±0,2 | 5,3±0,1 | 5,9 | 5,3±0,1 | 6,2 | 5,3±0,1 |
| 6 | 20,8±0,5 | 22,0±0,6 | 23,5±0,7 | 25,2±0,5 | 26,9 | 25,9±0,2 | 27,2 | 26,3±0,4 |
| 7 | 2,7±0,3 | 1,4±0,4 | 1,0±0,1 | 0,9±0,1 | 0,8 | 0,6±0,2 | 0,5 | 0,3±0,1 |
| 8 | 19,0±1,0 | 13,9±1,4 | 10,7±1,4 | 6,1±0,5 | 7,1 | 5,1±0,2 | 7,0 | 4,1±0,2 |
| 9 | 1,5±0,1 | 1,9±0,2 | 2,3±0,3 | 3,1±0,1 | 3,1 | 3,2±0,2 | 3,3 | 3,2±0,2 |
| 10 | 4,4±0,3 | 2,5±0,5 | 1,8±0,2 | 1,0±0,3 | 2,2 | 0,3±0,1 | 2,3 | 0,1±0,1 |
| 11 | 24,3±0,4 | 25,2±0,4 | 25,7±0,7 | 26,3±0,2 | 27,3 | 26,6±0,3 | 28,8 | 27,4±0,1 |
*Данные взяты из диаграммы на рис.
10Б.Таблица 6
Соотношение A2Eoxdeg/(A2E + iso-A2E) в зависимости от возраста донора *
| № пиков на рис. 10А | № группы на рис .10Б | |||||
| 1 17-29 лет | 2 30-39 лет | 3 40-49 лет | 4 50-59 лет | 6 60-69 лет | 8 70-79 лет | |
| (1-5) A2Eox,deg (%) | 27,32 ± 0,74 | 32,99 ± 1,31 | 35,01 ± 0,51 | 37,39 ± 0,31 | 38,41 ± 0,08 | O 4^ оо Sd OO H- |
| (6,8) A2E + iso-A2E (%) | 39,79 ± 0,78 | 36,01 ± 0,85 | 34,17 ± 0,79 | 31,29 ± 0,31 | 30,99 ± 0,17 | 30,44 ± 0,55 |
| A2Eox,deg/ A2E+ iso-A2E | 0,69 ± 0,03 | 0,92 ± 0,06 | 1,02 ± 0,04 | 1,19 ± 0,02 | 1,24 ± 0,01 | 1,32 ± 0,04 |
Соотношение было рассчитано из данных табл. 5 для образцов, полученных из кадаверных глаз без признаков патологии ретинального пигментного эпителия.
жания флуорофоров ЛГ из РПЭ данных образцов нами были отобраны кадавер- ные глаза без признаков патологии от доноров, близких по возрасту к донорами кадаверных глаз с признаками ВМД. РПЭ кадаверного глаза без патологии (норма) является равномерным, без очаговой патологии, в макулярной (фовеолярной) зоне имеется характерная более насыщенная (интенсивная) пигментация клеток. РПЭ глазного дна с признаками ВМД (патология) является неравномерным, разряженным, наблюдается картина «паркетного» глазного дна, в макулярной и парамакулярной зоне можно видеть перераспределение пигмента, множественные друзоподобные отложения в виде желтоватых слегка проминирующих образований
с неровными границами, окруженные зоной гиперпигментации, без тенденций к слиянию.
Из отобранных кадаверных глаз были получены суспензии клеток РПЭ и зарегистрированы их спектры флуоресценции (рис. 11А). Сравнительный флуоресцентный анализ показал, что при наличии патологии в РПЭ максимумы спектров флуоресценции суспензии клеток РПЭ сдвинуты в коротковолновую область по сравнению с образцами, полученными из кадаверных глаз без патологии. Это может указывать на повышенное содержание продуктов фотоокисления и фотодеградации А2Е в ЛГ. Более ощутимой является разница в положении максимума для пары а-б (564-528 нм, соответственно). Для второй пары в-г эта разница составила 563-540 нм, соответственно.
Из суспензии клеток РПЭ анализируемых образцов были получены хлороформные экстракты и методом ВЭЖХ проанализирован состав флуорофоров и их относительное содержание в этих хлороформных экстрактах (рис. 11Б; см. табл. 5).
Рис. 11. (А) Спектры флуоресценции суспензии клеток РПЭ из отдельных кадаверных глаз при возбуждении флуоресценции длиной волны 430 нм: а - норма (донор, 59 лет), б - патология (донор, 58 лет), в - норма (донор, 65 лет), г - патология (донор, 70 лет). Нормализованные. (Б) ВЭЖХ-ана- лиз хлороформного экстракта из РПЭ индивидуальных кадаверных глаз: а - норма (донор, 59 лет), б - патология (донор, 58 лет), в - норма (донор, 65 лет), г - патология (донор, 70 лет). Детекция по поглощению на длине волны 430 нм. 1-5 - А2Е . ; 6 и 8 - А2Е и iso-A2E, соответственно; пики 7, 9,
ox,deg
10 не определены (Арбуханова и др., 2012)
Сравнительный ВЭЖХ-анализ хлороформных экстрактов показал различие в относительном содержании флуорофоров ЛГ в РПЭ кадаверного глаза в норме и при патологии. В образцах, полученных из кадаверных глаз с визуально наблюдаемыми признаками ВМД, набор пиков для фракции 1, как можно видеть, более разнообразный, хотя их относительное содержание практически в 2 раза меньше (см. рис. 11Б, табл. 5). Наблюдается также увеличение относительного содержания флуорофоров из фракции 2 и увеличение относительного содержания А2Е (пик 6).
Таким образом, с одной стороны, показано увеличение с возрастом доноров относительного содержания как самого А2Е, так и A2Eoxdeg в хлороформных экстрактах, полученных из РПЭ индивидуальных кадаверных глаз без видимых патологий. С другой стороны, при наличии визуально наблюдаемых патологий в РПЭ видно изменение относительного состава флуорофоров хлороформного экстракта из РПЭ, а именно: уменьшение относительного содержания продуктов 1-й группы пиков, увеличение относительного содержания продуктов 2-й группы пиков (1-я и 2-я группы пиков, как мы предполагаем, могут быть продуктами фотоокисления и фотодеградации А2Е-А2Еох deg) и увеличение содержания А2Е. При этом меняется (смещается в коротковолновую область максимум спектра) и суммарный спектр флуоресценции суспензии клеток РПЭ.
Таким образом, сравнительный ВЭЖХ-анализ показал, что изучение качественного и количественного состава флуорофоров ЛГ в норме и при патологии становится актуальным и может являться предметом дальнейших исследований. Не исключено, что при некоторых патологиях содержание А2Е и продуктов его фотоокисления и фотодеградации может существенно отличаться от нормы.
6.