Кинетика образования биопленок отдельными клиническими штаммами микроорганизмов
При бактериоскопическом исследовании клинические штаммы условнопатогенных микроорганизмов, выделенных от пациентов основной группы, характеризовались следующими тинкториальными и морфологическими свойствами:
В мазках грамотрицательные E.coli располагались хаотично, имели форму коротких палочек с закругленными концами, размером до 2 мкм, спор не имели (рис.
8).
Рисунок 8. Бактериоскопия мазка. E.coli. Окраска по Граму, О6.100*
В мазках грамотрицательные Ps.aeruginosa, располагались одиночно, парами или короткими цепочками, имели форму палочек, прямых или слегка изогнутых, с закругленными концами, размером 0,5-0,7^1-3 мкм, спор и капсулы не имели, образовывали слизь (рис. 9).
Рисунок 9. Бактериоскопия мазка. Ps.aeruginosa. Окраска по Граму, 06.100*
В мазках грамположительные St.aureus имели правильную геометрическую шаровидную форму, располагались по одиночке, парами или в виде скоплений (гроздей), размеры микробных клеток составляли 0,5-1,5 мкм, жгутиков и спор не имели (рис. 10).
Рисунок 10. Бактериоскопия мазка. St.aureus. Окраска по Граму, 06.100*
В мазках грамположительные C.albicans представляли собой округлые, овоидные, цилиндрические или удлиненные, иногда неправильной формы клетки, с хорошо заметными вакуолями с небольшими ядрами, располагались хаотично (рис. 11).
Рисунок 11. Бактериоскопия мазка. C.albicans. Окраска по Граму, О6.100*
При бактериологическом исследовании колоний, образованных клиническими штаммами условно-патогенных микроорганизмов, были установлены следующие культурально-морфологические признаки.
Колонии E.coli на агаре были выпуклые с правильными очертаниями (круга), более или менее опалесцирующие, иногда слизистые (рис. 12).
Рисунок 12. Чашка Петри. Колонии E.coli.
Колонии Ps. aeruginosa крупные (3-5 мм), полупрозрачные, сероватого цвета с перламутровым оттенком, центр колонии более темный, чем периферия, края ровные, четкие. Окраска колоний становилась сине-зеленой к 1-м суткам с последующим проникновением пигмента пиоцианина в среду (рис. 13).
Рисунок 13. Чашка Петри. Колонии Ps. aeruginosa.
Колонии St. aureus круглые, 2-4 мм в диаметре, с ровными краями, выпуклые, непрозрачные, окрашены в цвет образуемого пигмента (рис. 14).
Рисунок 14. Чашка Петри. Колонии St. aureus.
Колонии C.albicans круглые, сметанообразные, беловатые, диаметром до 1 см., выпуклые, блестящие, обычно гладкие, с ровными краями и глубоким
врастанием в среду ветвистого древовидного мицелия. Бластоспоры (почки) располагаются нерегулярно по обеим сторонам мицелия. Хламидоспоры крупные (10-20 мкм), круглые, двухконтурные (рис. 15).
Рисунок 15. Чашка Петри. Колонии C.albicans.
Результаты биохимической идентификации клинических штаммов условно-патогенных микроорганизмов и патогенных грибов приведены в табл. 7-9.
Данные о чувствительности к антибактериальным препаратам клинических штаммов условно-патогенных микроорганизмов и патогенных грибов.
п
St.aureus, 10 КОЕ/мл. Антибиотикограмма пациента А., 37 лет.
Оксациллин - S Ципрофлоксацин - S
Г ентамицин - S Линкомицин - S
Эритромицин - S Ванкомицин - S
Рифампин - S Фузидиевая кислота - S
S - чувствительность.
Ps.aeruginosa, 105 КОЕ/мл.
Антибиотикограмма пациента Н., 23 лет:Амикацин - S Меропенем - S Цефепим - S Цефтазидим - S
Г ентамицин - S Пиперациллин/тазобактам - S Полимиксин Е (колистин) - S Ципрофлоксацин - S
S - чувствительность.
Таблица 8 - Результаты идентификации клинического штамма Ps.aeruginosa
С.albicans, 106 КОЕ/мл. Антибиотикограмма пациента И., 26 лет:
Кетоконазол - S Итраконазол - S Флюконазол - S
Фторцитозин - R Амфотерицин В - R Миконазол - S
S - чувствительность, R - устойчивость.
Таблица 9 - Результаты идентификации клинического штамма C.albicans
Таким образом, клинические штаммы условно-патогенных микроорганизмов и патогенных грибов имели типичные биохимические, морфологические, тинкториальные, культуральные и ферментативные свойства, присущие данным видам и обладали стандартной чувствительностью к антибактериальным препаратам.
В условиях in vitro нами были оценены способность указанных клинических штаммов к пленкообразованию и интенсивность роста биопленки. Факт пленкообразования клиническими и референсными штаммами оценивали также с помощью получения АСМ - изображений образцов, полученных из лунок микропланшетов (рис. 19-21)
19.1. Референсные штаммы 19.2. Клинические штаммы
St.aureus - область сканирования содержит множество шаровидных клеток размером 0,5*1,5 мкм
Рисунок 19 - АСМ-изображение. Атомно-силовая микроскопия мазка из осадка БАЛЖ. Препарат. Области сканирования 40*40 мкм.
20.1. Референсные штаммы
20.2. Клинические штаммы
Ps.aeruginosa - область сканирования содержит прямые или изогнутые палочки размером 0,5-3 мкм.
Рисунок 20 - АСМ-изображение. Атомно-силовая микроскопия мазка из осадка БАЛЖ. Препарат. Области сканирования 40*40 мкм.
21 .1. Референсные штаммы
21 .2. Клинические штаммы
C.albicans - область сканирования содержит овальные или почти круглые почкующиеся клетки
Рисунок 21 - АСМ-изображение. Атомно-силовая микроскопия мазка из осадка БАЛЖ. Препарат. Области сканирования 40*40 мкм.
Изучение интенсивности образования биопленки 15 клиническими штаммами Staureus демонстрировало прирост микробной биомассы на 1-е сутки культивирования в 6,15 раз по сравнению с контролем (р