Специфическая индикация биологических поражающих агентов

Специфическая индикация (СИ) - комплекс специальных мероприятий, проводимых медицинской и ветеринарно-санитарной службами для под­тверждения факта применения БО (при положительных результатах не­специфической индикации) и определения вида БПА.

Ее осуществление возлагается:

- на лабораторные подразделения СЭУ армий, фронтов, военных округов, флотов, санитарно-эпидемиологических отделов управления гос­питальных баз (СЭО УГБ), а также на ПСЭО воздушных армий и другие равные им лабораторные подразделения санитарно-эпидемиологических учреждений армий и фронта;

- лаборатории ветеринарно-эпизоотологических отрядов и других учреждений ветеринарно-санитарной службы.

К проведению специфической индикации могут привлекаться микро­биологические лаборатории инфекционных госпиталей и научно­исследовательских учреждений страны.

С учетом особенностей современных боевых действий, обусловлива­ющих частые передислокации санитарно-эпидемиологических учрежде­ний, и необходимости в связи с этим поэтапного последовательного ис­следования проб в различных лабораториях организация специфической индикации БС предусматривает строгое соблюдение принципа преем­ственности в работе (рис. 9).

В первую очередь исследованию подлежат:

- пробы воздуха;

- осколки и содержимое биологических боеприпасов;

- смывы из носоглотки людей, оказавшихся без защиты в зоне про­хождения аэрозольного облака;

- материалы от внезапно заболевших людей (животных).

Рис. 9. Принципиальная схема анализа проб

В основе специфической индикации БПА лежат методы лабораторного экспресс-анализа проб с помощью прямого метода флюоресцирующих ан­тител или реакции непрямой гемагглютинации по единой схеме, преду­сматривающей два взаимодополняющих этапа исследования:

- первый этап - выявление БПА с помощью экспресс-методов непо­средственно в нативной пробе без ее биологического обогащения;

- второй этап - выявление и идентификация БПА с помощью экс­пресс-методов анализа проб после их предварительного биологического обогащения путем накопления содержащихся в них возбудителей на пита­тельных средах, в культурах клеток, а также в органах и тканях чувстви­тельных лабораторных животных (рис.

Причем определение БС может проводиться как в сокращенном, так и в полном объеме, что зависит от возможности проводящих исследование лабораторий. Сокращенный объем исследований при этом предусматри­вает проведение экспресс-анализа только на первом этапе схемы специ­фической индикации БС, т.е. исследование материала без биологического накопления. При этом 2/3 пробы отделяется для пересылки в СЭО армии или фронта (рис. 10).

Рис. 10. Схема специфической индикации БС в сокращенном объеме

Полный объем исследования проводится в 2 этапа и предусматривает выявление и идентификацию до вида, содержащихся в пробах БС любой таксономической принадлежности (бактерий, риккетсий, хламидий, виру­сов, грибов, токсинов) при исследовании, как нативных материалов, так и проб после биологического обогащения (рис. 11).

Работу начинают с приема, регистрации, разработки и сортировки по­ступившего материала. Определяют очередность исследования достав­ленных проб, нумеруют их, устанавливают порядок усреднения, который

допускается при поступлении большого количества проб. Усредняются однородные пробы в количестве 3-5, не усредняются пробы, подлежащие первоочередному исследованию. Далее выделяют пробы, которые в на­тивном состоянии должны быть исследованы МФА и РНГА.

Объединение этих проб не допускается!

Рис. 11 Схема специфической индикации бактерий, риккетсий, хламидий, вирусов и токсинов

В первую очередь необходимо исследовать осколки биологических боеприпасов, а также материал около места разрыва, пробы воздуха в ме­стах предполагаемого застоя аэрозоля, смывы из носоглотки людей, нахо­дившихся в очаге без средств защиты, внезапно заболевших или умерших.

Далее приступают к первичной обработке и подготовке проб к иссле­дованию. Из нативного материала, который не подлежит концентрации, готовят мазки или мазки-отпечатки для иммунофлюоресцентной микро­скопии на 3-х предметных стеклах по 8-10 на каждом.

Сухие пробы (пищевые продукты, пыль, почва, фураж и т.д.) растира­ют в ступке или измельчают ножницами и заливают стерильным физрас­твором до получения 20% концентрации. Взвесь отстаивается 3-10 минут.

Жидкость над осадком фильтруют через 3 слоя марли.С осколков боепри­пасов, растений делают смывы (3-5 мл физраствора), готовят мазки и до­бавляют физраствор до 22 мл. Тампоны заливают 2-3 мл физраствора, встряхивают и отжимают. Желатиновый фильтр заливают 30-40 мл физраствора и выдерживают при 37 °С 30 мин на водяной бане, затем встряхивают до получения однородной взвеси.

Доставленные членистоногие (мухи, вши, слепни, клещи и т.д.) груп­пируются по 50-100 экземпляров каждого вида. Живые паразиты в до­ставленной посуде обрабатывают эфиром 1-2 мин для обездвиживания.

У насекомых отделяют желудочно-кишечный тракт и из каждого гото­вят мазки-отпечатки для иммунолюминесцентной микроскопии. Осталь­ных обрабатывают 70% спиртом 3-5 секунд, промывают стерильным физраствором, растирают в ступке с несколькими каплями физраствора, затем добавляют физраствор до 22 мл. Если исследуемый материал до­ставлен в объеме 50 мл и больше, то его фильтруют или центрифугируют. Фильтруют через мембранный фильтр №3, установленный в приборе Зей­тца. После фильтрации фильтр переносят в стерильную чашку Петри, из­мельчают и заливают 3-5 мл физраствора. Из смыва или из суспензии осадка после центрифугирования делают мазки для иммунолюминесцент- ной микроскопии. К оставшейся части смыва или суспензии добавляют физраствор до объема 22 мл. Полученный объем делят на 6 частей (рис. 12).

Вторая часть 20,0 мл используется для посева на питательные среды и постановки биопробы на ботулотоксин. Для возбудителя чумы использу­ют агар Хоттингера с генциан-виолетом 1:100 000 и с одним из стимуля­торов роста (кровь, сульфит натрия); палочки сибирской язвы - агар Хот- тингера с нанесенной на поверхность желточной эмульсией, возбудителя туляремии - агар Хоттингера с желтком; бруцеллеза - агар Хоттингера; палочек Сапа и мелиоидоза - 3-4% глицериновый Хоттингеровский агар; грибов - агар Сабуро с глюкозой.

Третья часть в объеме 2,5 мл используется для заражения 4-х белых мышей. Животных за 4 часа до введения материала обрабатывают корти­зоном для понижения сопротивляемости организма (по 0,5 мг в/м). Мате­риал вводят внутрибрюшинно в дозе 0,5 мл в смеси с 0,5 мл поливалент­ной антитоксической противоботулинической сывороткой (для нейтрали­зации ботулотоксина).

Первая часть смыва или суспензии в количестве 2,0 мл используется для постановки РНГА.

Рис. 12. Распределение смыва (суспензии осадка) для анализов

Четвертую часть материала в количестве 4,0 мл используют для накопления риккетсий и хламидий. Для этого во флаконе добавляют 0,1 мл сыворотки крови крупного рогатого скота и 0,1 мл смеси антибиотиков (4000 Ед/мл пенициллина + 2000 Ед/мл стрептомицина), выдерживают не менее часа в холодильнике и заражают культуру клеток, используя для этого 8 пробирок с монослоем клеток на пластинках.

Пятую часть материала в количестве 8 мл используют для вирусологи­ческих исследований. Ее центрифугируют 20 минут при 2 000 оборотов или фильтруют через 3 слоя марли. Фильтрат или жидкость над осадком после центрифугирования обрабатывают антибиотиками, добавляя 0,1 мл раствора антибиотиков 80 000 Ед/мл пенициллина + 40 000 Ед/мл стреп­томицина, выдерживают 2 часа при комнатной температуре и вводят 4 бе­лым мышам-сосункам интерцеребрально в количестве 0,03 мл. Наряду с заражением животных надосадочную жидкость, обработанную антибио­тиками и выдержанную не менее часа в холодильнике, вносят по 0,2 мл в 18 пробирок с клеточной культурой на стеклянных пластинках.

Шестая часть используется для повторения или продолжения иссле­дования.

Посевы на питательных средах просматриваются через 12, 18, 24, 30, 36 и 44 часа.

Из селезенки и брюшины готовят мазки-отпечатки для иммунофлюо- ресцентного исследования и суспензии для постановки РНГА.

Наблюдение за зараженными мышами для обнаружения ботулотокси­на проводится в течение 48 часов. Если за этот срок животные не погиба­ют, то наблюдение продолжается до 4-х суток. Выжившие мыши могут быть использованы для исследования на бактерии, риккетсии и вирусы. Животные, погибшие после интерцеребрального заражения, также вскры­ваются. Если животные выжили, то 2-х из них забивают и вскрывают че­рез 42-46 часов после заражения, а 2-х других оставляют для контроля и наблюдают в течение 72 часов, а затем забивают. Из оболочек и срезов мозга готовят мазки-отпечатки, а при комбинированном заражении их го­товят из селезенки и других органов.

Зараженные клеточные культуры исследуются следующим образом: через 20-24 часа и 42-46 (72) часов пластинки с монослоем тканевой культуры вынимают, высушивают и используют для постановки МФА, остающаяся культуральная жидкость может быть использована для поста­новки РНГА.

Мазки для МФА фиксируют на холоде (2-4°С) в течение 15-20 мин в химически чистом ацетоне. Окраску мазков проводят прямым методом. Используют полугрупповые, группо- и видоспецифические люминесци- рующие иммуноглобулины. Из нативного материала рекомендуется окра­сить на 1 стекле: 1-й квадрат - полугрупповой бактериальной люминес­центной сывороткой, 2-й квадрат - полугрупповым риккетсиозным имму­ноглобулином, 3-й и 4-й квадраты - полугрупповыми вирусными имму­ноглобулинами (2 препарата), 5 - кокцидиозным иммуноглобулином.

Если с каким-либо полугрупповым диагностическим препаратом будет получен положительный результат, то дополнительно окрашиваются 2 стекла - 2-е и 3-е, которые являются резервными.

Если полугрупповые диагностические препараты отсутствуют, то для окраски мазков сразу используют видо- и группоспецифические люминес- цирующие иммуноглобулины: для 2-го стекла - к возбудителям чумы, ту­ляремии, бруцеллеза, сибирской язвы (универсальные или антиспоровые),

сапа и мелиоидоза; для 3-го стекла - к возбудителям эпидемического сып­ного тифа, Ку-лихорадки, группы клещевых пятнистых лихорадок, псит­такоза, оспы и кокцидиоидоза. Резервным стеклом остается первое.

При целенаправленном исследовании проб воды к числу бактериаль­ных диагностических препаратов в ряде случаев добавляют холерный лю- минесцирующий иммуноглобулин.

Для того, чтобы сыворотки не подсыхали, препараты выдерживают под чашкой Петри, внутреннюю поверхность которой смачивают водой. После окрашивания препараты тщательно отмывают в течение 10 мин в 2­3 порциях физраствора и ополаскивают дистиллированной водой, высу­шивают на воздухе и исследуют под люминесцентным микроскопом с иммерсионным объективом, используя нефлюоресцирующее масло или химически чистый диметилфталат. Фон препарата будет оранжево­красный, а микроорганизмы, соответствующие иммунной сыворотке, бу­дут светиться изумрудным или желто-зеленым цветом.

Для получения достоверных результатов исследования (особенно при малых количествах возбудителя в пробе) под люминесцентным микроско­пом просматривают не менее 20-25 полей зрения. Результаты считаются положительными, если в препарате обнаруживаются хотя бы единичные (для мелких риккетсий и бактерий - не менее 10 особей) морфологически типичные микроорганизмы или пораженные вирусом, а также риккетсия­ми, хламидиями тканевые клетки (не менее 3-5 в препарате), специфиче­ски флюоресцирующие на 3-4 креста, при отрицательных контролях.

Результат отмечают по четырехкрестовой системе:

++++ - очень яркое свечение изумрудного или желто-зеленого цвета, и морфология микроорганизмов, по краям которых могут быть ярко светя­щиеся «ободки», очень четко выражена;

+++ - яркое свечение желто-зеленого цвета, и морфология возбудителя достаточно отчетливо выражена, часто со светящейся периферией;

++ и + - свечение в основном желтое, слабое, и морфология возбуди­теля нечетко или совсем не выявляется, ободки отсутствуют.

Результат считается положительным, если флюоресценция идет на +++. Для контроля мазки обрабатывают гетерологичными иммунными флюоресцирующими сыворотками. При вирусологических исследованиях контроли делают из нормальных тканевых культур и из органов здоровых животных.

При иммунолюминесцентной микроскопии морфология микроорга­низмов может измениться: увеличиваются размеры, интенсивнее красятся края клетки, т.к. антитела адсорбируются по периферии гомологичных микроорганизмов.

Для обнаружения чумного микроба и его дифференциации от псев­дотуберкулезного методом ФА используют капсульно-соматическую про­

тивочумную сыворотку и адсорбированную противопсевдотуберкулез- ную. Первая выявляет оба возбудителя, а вторая - лишь псевдотуберку­лезную палочку. Поэтому, если отмечается специфическое свечение с пер­вой сывороткой при отсутствии такового со второй, то это указывает на присутствие возбудителя чумы. Он имеет форму палочки, чаще овоидной формы с «ободком» и в бульонной культуре располагается цепочкой.

При обнаружении возбудителей сапа и мелиоидоза следует помнить, что они по морфологическим, биологическим и антигенным свойствам близки. Для их дифференциации используют адсорбированные иммунные сыпную и мелиоидозную сыворотки или неадсорбированную последнюю, которая выявляет оба возбудителя, а также мелиоидозную «ОН» сыворот­ку, выявляющую только палочку мелиоидоза. В положительном случае под микроскопом видны прямые или слегка изогнутые палочки различной величины с ярко светящейся периферией. Могут встречаться кокковидные и нитевидные особи.

Возбудители бруцеллеза и туляремии, обработанные соответствую­щими сыворотками, под микроскопом выглядят в виде очень мелких кок- кобактерий.

Для индикации сибиреязвенной палочки мазки окрашивают сибиреяз­венным универсальным люминесцирующим иммуноглобулином, а при его отсутствии смесью из равных объемов антиспорового и капсульно­соматического люминесцирующих иммуноглобулинов.

Сибиреязвенная бацилла под микроскопом имеет вид крупной палочки с обрубленными концами, палочки располагаются в одиночку, парами или цепочками. Споры имеют округлую или овальную форму.

Возбудители кокцидиоидомикоза бывают в двух формах: тканевой и культуральной. Применяются люминесцирующие иммуноглобулины про­тив тканевой фазы возбудителя, они специфически окрашивают, как ми­целиальную, так и тканевую фазу гриба и не выявляют возбудителей ги­стоплазмоза и бластомикоза. В препаратах, обработанных соответствую­щими сыворотками, возбудители флюоресцируют зеленым цветом в виде бочкообразных и прямоугольных клеток, расположенных свободно или по ходу мицелия.

В качестве БС наиболее вероятно применение возбудителей эпидемиче­ского сыпного тифа, пятнистой лихорадки Скалистых гор и Ку-лихорадки.

Используются иммунные меченые риккетсиозные сыворотки как полиг- рупповые, так и видо- и группоспецифические. Под люминесцентным мик­роскопом обнаруживаются разнообразные по форме и размерам образования в виде мелких овоидов, коротких и длинных палочек, иногда парнорасполо­женных бациллярных форм и извитых нитей, светящихся зеленым цветом.

Вокруг возбудителей из групп сыпного тифа, клещевых пятнистых лихорадок и цуцугамуши отмечается ярко флюоресцирующий ободок по

периферии, а для риккетсий Бернета характерно диффузное свечение всей клетки.

Индикация возбудителя пситтакоза осуществляется методом флюорес­цирующих антител в модификации с контрастированием неспецифическо­го свечения. Специфические флюоресцирующие групповые сыворотки позволяют выявить типичные элементарные тельца, результаты индика­ции могут только установить факт присутствия представителя из группы пситтакоза-орнитоза.

В препаратах возбудитель пситтакоза выявляется в виде ярко светя­щихся изумрудно-зеленым цветом (на оранжево-буром фоне) округлых образований разных размеров (от 0,2 до 0,5), располагающихся по отдель­ности, группами или компактными соединениями. Характерной особенно­стью специфической флюоресценции микроорганизмов группы пситтако­за является наличие вокруг них четко обозначенного ярко флюоресциру­ющего периферического «ободка». Имеет значение и количество выяв­ленных в препарате особей или их скоплений.

Специфическая индикация вирусов во внешней среде, а также в пере­носчиках, природном резервуаре вирусов и в организме человека прово­дится по единой схеме.

МФА при исследовании мазков из нативного материала может обеспе­чить выявление лишь крупных возбудителей (вируса натуральной оспы, Марбург, Эбола).

Вирус натуральной оспы выявляется противооспенной флюоресциру­ющей сывороткой, которая окрашивает все другие вирусы подгруппы осповакцины (алястрим, вирус коровьей оспы, вирус вакцины и др.). По­этому окончательный ответ может быть выдан после дифференциации от других вирусов по специальным тестам, как например, выращивание за­раженных клеточных культур при «критических» температурах (37 °С, 38 °С, 39-40 °С). Вирус оспы размножается при температуре не выше 38- 38,5°С, а вирусы вакцины и коровьей оспы - при всех указанных темпера­турах, вирус алястрима - при 37-37,5 °С.

В мазках, обработанных флюоресцирующей сывороткой, обнаружива­ются элементарные тельца Пашена в виде мельчайших округлых образо­ваний, ярко флюоресцирующих изумрудно-зеленым цветом. Могут обна­руживаться и скопления элементарных телец - включения в виде более крупных образований различных форм и размеров.

Для окончательного отрицательного ответа необходимо наблюдать за зараженными культурами клеток в течение 6 дней, а не 48 часов, как это предусмотрено схемой. Поэтому в неясных случаях исследование необхо­димо продолжить.

Возбудители аргентинской (вирус Хунин), боливийской (вирус Мачупо) геморрагических лихорадок и лихорадки Ласса являются членами семейства

ареновирусов. Люминесцирующие сыворотки не обеспечивают дифферен­циации внутри этой группы. Для дифференциации применяется реакция нейтрализации. Вирусы Марбург и Эбола выделены в семейство филовиру­сов и вызывают у человека неразличимые по клинике заболевания. Сходны они и по морфологии, но различаются по антигенным свойствам.

Возбудители лошадиных энцефаломиелитов (венесуэльского, восточ­ного и западно-американского) относят к семейству альфа вирусов (арбо­вирусы гр. А).

Применяют видоспецифические люминесцентные сыворотки, что обеспечивает индикацию до вида.

Вирусы возбудителя желтой лихорадки и лихорадки Денге входят в семейство флавивирусов. Люминесцентные сыворотки обеспечивают их дифференциацию от других флавивирусов и друг от друга. Вирусы япон­ского и клещевого энцефалитов относятся также к семейству флавивиру- сов. К вирусу японского энцефалита получен видоспецифический люми- несцирующий иммуноглобулин, который обеспечивает дифференциацию возбудителя от других флавивирусов. Люминесцентный иммуноглобулин к вирусу клещевого энцефалита выявляет также вирусы омской геморра­гической лихорадки, киасанурской лесной болезни и другие флавивирусы комплекса клещевого энцефалита в силу их близкого антигенного родства.

Вирус лихорадки долины Рифт относят к семейству буньявирусов, име­ется два варианта возбудителя: пантропный и нейротропный. При обработке специфической сывороткой свечение наблюдается в цитоплазме зараженных клеток. Вирус конго-крымской геморрагической лихорадки входит также в семейство буньявирусов, как и вирус-возбудитель геморрагической лихо­радки с почечным синдромом. Причем первый возбудитель выявляют в мо­нослое зараженных клеток при помощи МФА, а вирус Hantaan выявляют в нативном материале и от больных людей и животных при помощи РНГА или непрямого МФА, используя сыворотку реконвалесцентов.

РНГА основана на явлении скучивания эритроцитов, обработанных иммунной сывороткой, под влиянием соответствующего антигена.

Она ставится в 2-х пробирках или в лунках полистироловых пласти­нок. Первая пробирка (лунка) - опытная, вторая - контрольная. Исследуе­мая проба вносится по 0,25 мл в обе пробирки (лунки), затем в контроль­ную пробирку для проверки специфичности полученных результатов вно­сят одну каплю соответствующей иммунной сыворотки (в разведении 1:20), предварительно прогретую при 56°С 30 минут, затем встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 15-20 минут. Затем в контроль­ную и опытную пробирки (лунки) вносят по 1 капле взвеси эритроцитов, сенсибилизированных антителами к соответствующему антигену. Про­бирки встряхивают и оставляют при комнатной температуре. Реакция счи­тается положительной, если в опытной пробирке эритроциты равномерно

или в виде зонтика осели на дно. При отрицательном результате эритро­циты оседают в виде маленькой пуговки. В контрольной пробирке должна быть четкая отрицательная реакция.

Для анализа проб используют полигрупповые, видо- и группоспеци­фические диагностические препараты. Вначале при исследовании натив­ного материала РНГА ставится ко всем группам БС (бактериям, риккетси­ям и хламидиям, вирусам, грибам и токсинам). В случае положительного результата проводится реакция с соответствующими видоспецифическими диагностикумами. Если полигрупповые препараты отсутствуют, РНГА ставят сразу с видо- и типоспецифическими диагностикумами.

Результаты исследования по проведенной схеме оцениваются следу­ющим образом.

Предварительный ответ можно выдать при обнаружении в нативном материале патогенных бактерий, грибов, риккетсий и вирусов двумя ме­тодами (ФА и РНГА), а ботулинический токсин - методом РНГА. Отрица­тельный предварительный ответ на основании результатов исследования нативного материала пробы лаборатория не выдает.

Окончательный ответ о наличии в материале БС (кроме ботулиниче­ского токсина) выдается при обнаружении методами ФА и РНГА бакте­рий, грибов, риккетсий и вирусов соответственно в посевах на питатель­ных средах, клеточных культурах и в органах зараженных животных. От­вет о присутствии токсина ботулизма в материале выдается при положи­тельной биопробе на белых мышах.

Окончательный отрицательный ответ выдается только на основании повторных отрицательных результатов исследования на первом и втором этапах анализа, а также полного микробиологического анализа, проведен­ного классическими методами исследования.

Чувствительность основных методов специфической индикации БПА обеспечивает выявление микроорганизмов, если последние содержатся в 1 мл исследуемого материала в количестве 100-500 тыс. микробных тел (0,5 мкг токсинов). В микробиологических лабораториях широко исполь­зуют различные модификации ИФА (для подвижных медицинских ком­плексов - только мембранно-фильтрационный точечный дот-ИФА) и по­лимеразную цепную реакцию (ПЦР). По мере насыщения лабораторий со­ответствующими техническими и реагентными средствами для СИ БПА можно использовать ИФА и ПЦР.

В зависимости от конкретных условий боевой обстановки объем иссле­дований в СЭУ может изменяться относительно как перечня подлежащих выявлению видов БПА, так и этапов анализа проб. Однако, во всех случаях для своевременной организации и проведения в войсках мероприятий БЗ и ликвидации последствий применения противником БО, в предельно корот­кие сроки исследованию должны подвергаться пробы на содержание в них

тех БПА, которые наиболее опасны для личного состава войск. К ним отно­сятся возбудители чумы, сибирской язвы, натуральной оспы и некоторых геморрагических лихорадок (Ласса, Эбола и др.), а также ботулинический токсин. В последующем СИ подлежат возбудители туляремии, бруцеллеза, сапа, мелиоидоза, Ку-лихорадки, эпидемического сыпного тифа, венесуэль­ского энцефаломиелита лошадей, лихорадок долины Рифт и западного Нила, орнитоза, а также стафилококкового энтеротоксина.

Специалисты санитарно-эпидемиологических лабораторий дивизий и им равных подразделений (ПСЭЛ, ОСЭР) участвуют в санитарно- эпидемиологи-ческой разведке, сборе и сортировке проб и обеспечивают пересылку 2/3 каждой пробы в СЭО военных округов, армии или фронта для проведения специфической индикации.

Специфическую индикацию проводят в сокращенном объеме (первый этап единой схемы) только в отношении возбудителей высококонтагиоз­ных инфекций (чума, натуральная оспа) и обладающих высокой устойчи­востью во внешней среде (сибирская язва, Ку-лихорадка), а также иссле­дуют пробы на содержание в них ботулинического токсина.

При усилении лабораторий необходимыми силами и средствами объем исследований может быть расширен для проведения специфической инди­кации в отношении других возбудителей опасных инфекционных заболе­ваний (восточного и западного энцефаломиелитов лошадей, лихорадок денге, Мачупо, аргентинской и желтой лихорадок, конго-крымской гемор­рагической лихорадки, японского энцефалита и др.), а также токсинов ри­цина и сакситоксина.

В ОСЭО АМедБ и СЭО фронта выполняют специфическую индика­цию БПА в полном объеме, предусматривающем выявление и идентифи­кацию до вида содержащихся в пробах БПА, наиболее значимых в военно- эпидемиологи-ческом отношении.

В исключительных случаях, вызванных особо сложной боевой обста­новкой, специфическая индикация может (по указанию начальника меди­цинской службы) осуществляться только экспресс-методами исследования из нативного материала проб без биологического обогащения (первый этап исследования). При этом выдается только предварительный положи­тельный ответ, а материалы пробы передаются для дальнейшего исследо­вания в полном объеме.

При необходимости окончательного подтверждения отрицательных результатов индикации БПА, а также во всех случаях, вызывающих со­мнение или требующих контрольной проверки и выделения возбудителя в чистой культуре, материалы пробы подлежат дальнейшему исследованию с помощью общепринятых методов полного (классического) микробиоло­гического (вирусологического) анализа. Эти исследования целесообразно проводить в базовых бактериологических, вирусологических или других

лабораториях СЭУ фронта, военных округов или специализированных научно-исследовательских учреждениях страны.

Объем исследований в зависимости от конкретных условий может определяться изменением перечня подлежащих выявлению видов БПА и числа этапов анализа проб.

В зависимости от этапа и результатов исследования, выдаваемые лабо­раторией ответы могут быть предварительными и (или) окончательными. Предварительный ответ выдается только на основании положительных ре­зультатов исследования нативных материалов пробы (4-12 ч). Отрица­тельный предварительный ответ на основании результатов исследования нативного материала пробы лаборатория не выдает.

Окончательный ответ о наличии в пробе БС (48-72 ч) может быть вы­дан лабораторией при получении с помощью МФА и РНГА положитель­ных результатов исследования биологически обогащенных проб (положи­тельных результатов биопробы на ботулинический токсин).

Окончательный отрицательный ответ выдается только на основании повторных отрицательных результатов исследования на первом и втором этапах анализа, а также полного микробиологического анализа, проведен­ного в соответствии с классическими методами исследования.

Приемы и методы полного (классического) микробиологического ана­лиза длительны и трудоемки, так как предполагают обязательное выделе­ние чистой культуры возбудителя и его идентификацию. Как правило, в лабораториях военно-медицинской службы для специфической индикации БС они не применяются.

При выявлении БПА определяют род, группу и вид бактерий, риккет­сий, вирусов и токсинов по характерным признакам (морфология, анти­генные свойства, цитопатогенное действие, локализация возбудителя в культурах клеток, в органах и тканях животных и др.). Некоторые из этих свойств (морфология и антигенные свойства) возбудителей могут быть выявлены методами экспресс-анализа в течение 4-6 ч, а после предвари­тельного биологического обогащения пробы на питательных средах, в культурах клеток, в органах и тканях чувствительных лабораторных жи­вотных - через 1-3 сут.

С учетом особенностей современных боевых действий, обусловлива­ющих частые передислокации СЭУ, и необходимости в связи с этим по­этапного последовательного исследования проб в различных лабораториях организация специфической индикации БПА предусматривает строгое со­блюдение принципа преемственности в работе.

Принцип преемственности в работе лабораторий предполагает:

- единые способы отбора проб;

- единые методы исследования и схему анализа;

- общую унифицированную (сквозную) нумерацию и обозначение ма­териалов проб в зависимости от этапа их обработки и исследования;

- обязательную для всех лабораторий, проводящих специфическую индикацию без биологического обогащения пробы (в сокращенном объе­ме), пересылку в кратчайшие сроки не менее 2/3 каждой пробы в СЭО ОМедБ армии и/или СЭО фронта, обеспечивающие исследование проб в полном объеме;

- усиление лабораторий, вынужденных проводить специфическую индикацию БПА в полном объеме, за счет дополнительных сил и средств;

- замену для продолжения индикационных исследований лаборато­рий, подлежащих передислокации вслед за войсками, новыми подразделе­ниями;

- четкую взаимную информацию на ТВД как между войсками РХБ- защиты, СЭУ и лечебными учреждениями войск и частей тыла, так и меж­ду соответствующими учреждениями гражданского здравоохранения.

Преемственность в работе лабораторий предусматривает также воз­можность пересылки исследуемых проб (в виде первичных посевов и за­раженных животных) в другие лаборатории для продолжения анализа.

При соблюдении принципа преемственности в работе лабораторий со­здается реальная возможность осуществлять поэтапный высококачествен­ный анализ проб и одновременно исчезает вынужденная необходимость в повторении исследований, выполненных на более ранних этапах.

В условиях локальных военных конфликтов (ЛВК) организация спе­цифической индикации в зависимости от состава СЭУ может носить иной характер. Ее проведение возможно мобильными специализированными группами СЭУ ОГВ, действующими в зоне ЛВК, либо пробы должны пе­редаваться в центральные военно-медицинские учреждения или в регио­нальные лаборатории центров ТУ Роспотребнадзора и ФГУЗ «Центр гиги­ены и эпидемиологии» Минздрава России.

Возможны случаи, когда используемые средства и методы неспецифи­ческой индикации БС не смогут выявить факт их применения, особенно при диверсионном способе. Поэтому при появлении среди личного соста­ва массовых однотипных инфекционных заболеваний в условиях, когда отсутствуют естественные предпосылки для их возникновения, необходи­мо исключить применение противником БО. При этом мероприятия меди­цинской службы должны быть направлены, прежде всего, на клиническую диагностику заболеваний и проведение эпидемиологического обследова­ния с целью выявления причин и условий заражения личного состава.