Молекулярно-генетические маркеры.

Из 103 пациентов, перенесших ранее различные виды резекции желудка по поводу рака, у 40 (38,8 %) больных в процессе наблюдения в послеоперационном периоде помимо стандартных исследований в материале слизистой культи желудка полученном при эзофагогастродуоденоскопии определяли молекулярногенетические маркеры.

В работе использована панель молекулярно-генетических маркеров, разработанная и опробованная в клинике факультетской хирургии имени Н.Н. Бурденко, которая включала определение аномального метилирования генов CDHl, RASSF1A, MLHl, N33, DAPK и RUNX3.

Метилирование ДНК - это процесс ковалентного присоединения метильной группы к цитозину в составе CG-динуклеотида, катализируемый ферментом ДНК-метилтрансферазой. Метилирование промотерных районов различных генов приводит к транскрипционному молчанию гена, способствуя полной инактивации генной экспрессии [40; 86].

Аномальное метилирование генов-супрессоров является распространенным эпигенетическим процессом инактивации генов в опухоли и может служить маркером опухолевого роста. Аномальное метилирование генов-супрессоров является одним из ранних событий канцерогенеза и может выявляться задолго до клинического проявления опухолевого роста. Аномальное метилирование генов CDH1, RASSF1A, MLH1, N33, DAPK, RUNX3 приводит к функциональной инактивации этих генов.

Ген CDH1 кодирует белок Е-кадгерин, который отвечает за адгезию клеток. Снижение активности гена приводит к утрате клеточных контактов, и приобретению опухолевой клеткой способности к инвазии и метастазированию [101; 102; 104; 131].

Ген RASSF1А - ген-супрессор, участвует в регуляции клеточной пролиферации и в апоптозе, кодирует фактор, контролирующий клеточный цикл [111; 130].

Ген MLH1 - ген-супрессор, кодирует фактор, участвующий в репарации неспаренных оснований, возникающих вследствие ошибок репликации ДНК [107].

Ген N33 проявляет супрессорные функции и демонстрирует высокий уровень метилирования в различных типах опухолей происходящих из эпителия [24; 40].

Ген DAPK кодирует белковую киназу, обеспечивающую апоптоз и предотвращающую опухолевую прогрессию в результате ингибирования поляризации клетки. Инактивация гена DAP-киназы приводит к усилению миграции и инвазии опухолевых клеток, препятствует апоптозу [132].

Ген RUNX3 кодирует белок, относящийся к семейству транскрипционных факторов, содержащих Runt-домен. Функция белка состоит в образовании комплекса, который связывается с коровой последовательностью ДНК, находящейся во многих энхансерных и промоторных областях различных генов, что приводит к активировации или подавлению транскрипции этих генов. Этот белок также может взаимодействовать и с другими транскрипционными факторами, усиливая генную экспрессию. [125].

Таким образом, все перечисленные гены обладают супрессорными свойствами, непосредственно влияя на сдерживание опухолевого роста. Их инактивация посредством аномального метилирования способствует развитию опухоли. Стоит отметить, что инактивация генов-супрессоров не выявляется при развитии воспалительных заболеваний различных органов, а также при обратимых гиперпластических процессах. Аномальное метилирование определяется на уровне дисплазии 2-3 степени и ассоциировано с началом опухолевого роста, что делает данные молекулярно-генетические маркеры высокочувствительными для раннего определения опухолевого роста.

2.4.1.