Процесс витрификации ооцитов
С целью осуществления витрификации ооцитов применяли набор Kitazato Cryotop Safety Kit Vitrification #VT401. Одновременно помещали на один Cryotop не более двух клеток. При витрификации ооцита необходимой частью программы явилось удаление клеток яйценосного бугорка.
Затем производили эквилибрацию ооцита. При эквилибрации восстанавливали полностью объем ооцита. Эквилибрация ооцита считалась завершенной, если ширина перевителлинового пространства была равной ширине до погружения в равновесный раствор ES.Набор для витрификации ооцитов и эмбрионов методом Криотоп (Cryotop) № 0 Основной раствор (BS): 1 флакон 1,5 мл (Исключительно для витрификации ооцитов)
№ 1 Равновесный раствор (ES): 1 флакон 1,5 мл № 2 Раствор для витрификации (VS1, VS2): 2 флакона по 1,5 мл Плавно перемещая кончик пипетки по периметру BS, постепенно добавляли к среде 20 мкл ES, инкубировали 3 минуты. Ооциты хорошего качества, находящиеся на метафазе II деления, во время данной процедуры «сжимались». Постепенное поступление раствора производили для нерезкого изменения осмолярности и выживания ооцита после витрификации. Затем также добавляли 20 мкл раствора ES, инкубировали 3 минуты. Таким же способом добавляли 240 мл ES, инкубирая 9 минут. К концу времени инкубации соотношение размеров зоны пеллюцида и периветиллинового пространства ооцита не отличалось от нативного. Затем в минимальном объеме ES ооцит переносили в VS1, эвакуировали из пипетки оставшийся раствор ES, на дно планшета. В последующем, ооцит аспирировали и переносили на новый участок VS1. Затем ооцит переносили в раствор VS2. Следующим шагом данного метода явилось - ооцит в минимальном объеме среды переносили на кончик Cryotop. Кончиком пипетки эвакуировали излишки среды и быстро опускали конец Cryotop в верификационный контейнер с жидким азотом и под слоем жидкого азота пинцетом надевали защитный чехол на Cryotop. Размораживание криоконсервированных ооцитов проводили при комнатной температуре с использованием набора Kitazato Cryotop Safety Kit Thawing #VT402. После размораживания ооцитов производили ИКСИ и оценивали оплодотворение.
2.8
Еще по теме Процесс витрификации ооцитов:
- Сравнение различных режимов контролируемой овариальной стимуляции в программах витрификации ооцитов доноров
- 1.1Современные возможности использования криоконсервированных ооцитов в программах ВРТ, методы криоконсервации ооцитов
- Возможности использования селективного переноса одного эмбриона в программах донорства ооцитов
- 1.2. Показания и возможности применения метода криоконсервации ооцитов в программах ВРТ
- Качественная оценка полученных ооцитов
- Сравнение нативных и витрифицированных донорских ооцитов при различных протоколах контролируемой овариальной стимуляции
- Клиническая характеристика доноров ооцитов и реципиентов
- Эмбриологический этап - оценка качества ооцитов в программах ВРТ
- Оценка оплодотворения донорских ооцитов
- Основные факторы, влияющие на эффективность программ донорства ооцитов
- Результаты использования корифоллитропин-альфа в программе донорства ооцитов
- Контролируемая овариальная стимуляция у доноров ооцитов и пациенток с онкологическими заболеваниями