ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ .................................................................................................................. 5

ГЛАВА 1 Криптококк и криптококкоз .....................................................................

1.1 Характеристика комплекса видов

Cryptococcus neoformans / Cryptococcus gattii ................................................ 11

1.2 Патогенность криптококков............................................................................. 16

1.2.1 Основные факторы патогенности C. neoformans и C. gattii ............... 16

1.2.2 Другие факторы патогенности C. neoformans...................................... 20

1.3 Клинические варианты и факторы риска развития криптококкоза ............. 23

ГЛАВА 2 Штаммы C.neoformans и врожденный иммунный ответ ....................... 26

2.1 Взаимодействие C. neoformans с макрофагами.............................................. 26

2.1.1 Паттерн-распознающие рецепторы....................................................... 26

2.1.1.1 Маннозный рецептор .................................................................. 27

2.1.1.2 Дектин – 1 .................................................................................... 29

2.1.1.3 Toll-рецепторы ............................................................................ 31

2.2 Роль опсонинов в иммунном ответе при криптококкозе .............................. 32

2.2.1 Компоненты комплемента ..................................................................... 32

2.2.2 Антитела .................................................................................................. 33

2.3 Факторы микробоцидности макрофагов ........................................................ 34

2.3.1 Кислородзависимые факторы микробоцидности ................................ 34

2.3.1.1 Образование активных продуктов кислорода..........................

2.3.1.2 Реактивные промежуточные продукты азота ........................ 36

2.3.2 Кислороднезависимые факторы микробоцидности ............................ 37

2.4 Медиаторы иммунного ответа ......................................................................... 38

2.5 Резистентность к антифунгальным препаратам при криптококковой инфекции ............................................................................................................ 42

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 3 Объекты и методы исследования ............................................................. 46

3.1 Объекты исследования ..................................................................................... 46

3.1.1 Штаммы Cryptococcus neoformans ........................................................ 46

3.1.2 Экспериментальные животные ............................................................. 47

3.2 Методы исследования....................................................................................... 48

3.2.1 Морфология культур C. neoformans...................................................... 48

3.2.2 Видовая идентификация Cryptococcus neoformans ............................. 48

3.2.3 Определение вирулентности криптококков на лабораторных животных ................................................................................................. 50

3.2.4 Определение фенолоксидазной активности C. neoformans ................ 51

3.2.5 Получение перитонеальных макрофагов и культивирование их

in vitro ....................................................................................................... 51

3.2.6 Определение фагоцитарной активности макрофагов ......................... 52

3.2.7 Методы определения факторов микробоцидности .................................... 53

3.2.7.1 Продукция нитроксид анионов… ........................................... 53

3.2.7.2 Продукция супероксид анионов в тесте с нитросиним тетразолием ...............................................................................

3.2.8 Определение уровня продукции цитокинов макрофагами ................ 55

3.2.9 Определение цитотоксической активности перитонеальных макрофагов .............................................................................................. 56

3.2.10 Методы определения чувствительности C. neoformans к антифунгальным агентам различного происхождения....................... 56

3.2.10.1 Определение чувствительности C. neoformans к флуконазолу и вориконазолу (CLSI M44-A)...................................... 56

3.2.10.2 Определение чувствительности к протегринам методом серийных разведений............................................................................ 58

3.2.11 Методы статистического анализа полученных данных .................... 59

ГЛАВА 4 Морфо-биологическая характеристика штаммов С. neoformans .......... 61

4.1 Происхождение изолятов С. neoformans ........................................................ 61

4.2 Морфологическая и биологическая характеристика клинических

изолятов C. neoformans .................................................................................... 64

4.3 Определение патогенности криптококков на экспериментальных

животных ........................................................................................................... 68

ГЛАВА 5 Взаимодействие штаммов C.neoformans разной вирулентности с перитонеальными макрофагами in vitro.................................................................... 71

5.1 Фагоцитарная активность макрофагов в отношении C. neoformans ........... 71

5.2 Влияние штаммов C. neoformans разной вирулентности на продукцию факторов микробоцидности перитонеальными макрофагами ..................... 77

5.2.1 Влияние штаммов C. neoformans разной вирулентности на способность макрофагов к продукции супероксиданионов in vitro .. .77

5.2.2 Влияние штаммов C. neoformans на способность макрофагов продуцировать нитроксидные радикалы in vitro .................................

5.3 Определение цитотоксической активности макрофагов по отношению к штаммам C. neoformans разной вирулентности ............................................. 82

5.4 Оценка спектра цитокинов, вырабатываемых макрофагами, при взаимодействии с криптококками in vitro ...................................................... 84

5.5 Чувствительность штаммов C. neoformans разной вирулентности к азоловым препаратам и антимикробным пептидам животного происхождения ........ . 89

ГЛАВА 6 Заключение ................................................................................................. . 94

ВЫВОДЫ ................................................................................................................... 108

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ..................................................................... 109

ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ .................................... 109

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ........................................................................................... 110

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ................................................................. 142