Результаты морфологических исследований тканей зубов при лечении кариеса дентина у экспериментальных животных
Сравнительное изучение экспериментальных групп животных продемонстрировало значительные различия между ними. Аналитический обзор и морфометрическое исследование гистологических препаратов при традиционном лечении и с применением дентин-герметизирующей жидкости в сочетании с низкоинтенсивным лазерным излучением позволили выявить морфологические преобразования тканей зуба на фоне предложенного лечения.
Первая группа (контрольное общепринятое лечение кариеса зубов) крыс линии Wistar, ткани зубов которых характеризуются небольшим содержанием одонтобластов, расположенных либо в виде уплощенного слоя клеток по периферии пульпы, либо с превалированием по форме плоских и кубических одонтобластов, в одонтобластическом слое прослеживаются зоны разряжения, имеет место перинуклеарный отек (Рисунок 3 А), выявляютя очаги гипоми- нерализованного дентина. Дентинные трубочки в околопульпарной зоне слабо контурируются, имеют неравномерную плотность и локальную извилистость (Рисунок 3 Б). Фибробласты пульпы немногочисленны, часто не имеют четких контуров, ядра светлые с краевым расположением хроматина (Рисунок 4). Среди клеточных элементов встречаются макрофаги и лимфоциты. Выявляются капилляры, как с выбухающими, так и слущенными в просвет сосуда эндотелиальными клетками. Встречаются деструктивно измененные капилляры.
Во второй группе (опытное лечение кариеса зубов методом глубокого фторирования дентина и низкоинтенсивного лазерного излучения) животных, в одонтобластическом слое дентина наряду с плоскими по форме клетками чаще встречаются кубические и цилиндрические, которые формируют «палисадообразный» слой по периферии пульпы (Рисунок 5). Репаративный дентин нередко представлен полиморфными одонтобластами со значительным количеством клеток призматической и грушевидной формы (Рисунок 6 А), дентинные
трубочки широкого диаметра, контуры дентинных трубочек четко очерчены (Рисунок 6 Б).
Морфологическая картина зубов животных, у которых при лечении применяли дентин-герметизирующую жидкость в сочетании с низкоинтенсивным лазерным излучением, отличалась увеличением объемной плотности предентина и одонтобластического слоя в 1,4 раза.Морфометрическое исследование продемонстрировало так же увеличение у них содержания капилляров в пульпе зубов, объемная плотность которых возросла в 3,4 раза, по сравнению с I группой. Наблюдалось увеличение количества эндотелиоцитов в 3,4 раза, отмечено возрастание содержания малодифференцированных и клеток фибробластического ряда (Таблица 3.1).
Таблица 3.1 Динамика содержания клеточных структур и численной плотности капилляров в гистологических препаратах
| Г руппы | Объемная плотность одонтобласти- ческого слоя** | Объемная плотность капилляров** | Объемная плотность эндотелиоцитов * * | Объемная плотность фибробластов** |
| I группа (крыса) n=30 | 23,5±1,1 | 5,7±0,3 | 51,3±1,2 | 12,1±0,3 |
| II группа (крыса) n=30 | 29,6±1,0* | 19,3±0,5* | 173,7±2,5* | 18,9±0,2* |
| I группа (собака) n=20 | 20,4±0,9 | 12,4±0,7 | 62,5±1,1 | 19,3±0,7 |
| II группа (собака) n=20 | 28,7±0,9* | 31,5±0,5* | 180,5±1,7* | 27,6±0,5* |
* Отличия между I и II группами достоверны при p < 0,05
** Объемная плотность структурных элементов выражена в условных единицах (усл.ед.)
Вышеизложенное свидетельствует о стимулирующем влиянии предложенного нами метода лечения на одонтобластический слой клеток, микроцир- куляторное русло и структуры пульпы зуба.
Подобную картину наблюдали и у собак. В препаратах зубов I группы животных (Рисунок 7 А, Б) одонтобласты представлены 1-2-мя слоями клеток по периферии пульпы, тогда как на препаратах II группы (Рисунок 8 А, Б) отмечается увеличение объемнойплотности слоя одонтобластов, образование «гофрированности» одонтобласти- ческого слоя, представленного преимущественно цилиндрическими клетками (Рисунок 9).
В пульпе, в субодонтобластическом слое ее данной эксперементальной группы наблюдается увеличение содержания клеток фибробластического ряда, среди которых располагаются малодифференцированные элементы (Рисунок 10 А, Б). Соединительная ткань центрального слоя пульпы содержит фибробласты различной формы, лежащие более рыхло, чем в предыдущем слое. Здесь также располагаются макрофаги.
Рисунок 3 - Микрофото. Окраска Ван Гизон. х400. А - ткани зуба I (контрольной) группы животных (крысы). 1 - одонтобласты уплощенной и кубической формы, 2 - в одонтобластическом слое прослеживаются зоны разряжения, имеет место перинуклеарный отек. 3 - очаги гипоминерализо- ванного дентина. Б - дентинные трубочки в околопульпарной зоне слабо контурируются, 4 - трубочки имеют неравномерную плотность и локальную
извилистость.
Рисунок 4 - Микрофото х400. Ткани зуба I группы животных (крысы). А - окраска Ван Гизон-одонтобласты плоские (обозначены стрелкой); Б - окраска Ван Гизон - одонтобласты по форме плоские и низкопризматические 1 , вокруг одонтобластов заметны участки разряжения тканей; 2 - пульпа. В - окраска гематоксилином и эозином - (3) ядра фибробластов пульпы светлые.
Рисунок 5 - Микрофото. Окраска Ван Гизон. х400. Ткани зуба II группы животных (крысы). А - Отмечается увеличение количества одонтобластов , наряду с плоскими по форме клетками встречаются кубические и цилиндрические (1); 2- предентин.
Б - Возрастает объемная плотность одонтобластического слоя (3) ; 4 - пульпа.
Рисунок 6 - Микрофото. Окраска Ван Гизон. х400. Ткани зуба II (опытной) группы животных (крысы). А - репаративный дентин представлен полиморфными одонтобластами (1) со значительным количеством клеток призматической и грушевидной формы, Б - дентинные трубочки широкого диаметра, 2 - контуры дентинных трубочек четко очерчены.
Рисунок 7 - Микрофото. Окраска Ван Гизон. х400. Ткани зуба I группы животных (собаки). Одонтобласты обозначены стрелкой. А - один слой одонтобластов. Б - клеточные элементы пульпы со значительным содержанием
волокнистых компонентов.
Рисунок 8 - Микрофото. Окраска Ван Гизон. х400. Ткани II группы зубов (собаки). Увеличение клеточного состава одонтобластов во II-й группе животных (собаки). А - увеличение объемной плотности сосудов и увеличение объемной плотности рыхлой соединительной ткани пульпы, Б - образование
«гофрированности» одонтобластического слоя.
Рисунок 9 - Микрофото. Окраска Ван Гизон. х400. Ткани II группы зубов (собаки). Значительное содержание клеточных элементов одонтобластического слоя во II-й группе препаратов (собаки). 1 - одонтобласты.
Рисунок 10 - Микрофото. Ткани II группы зубов (собаки). А - окраска Ван Гизон. х400. Б - окраска гематоксилином и эозином. Х 400. Значительное содержание клеток фибробластического ряда, среди которых располагаются малодифференцированные клетки (II группа - собаки).
Иммуноцитохимическое исследование пульпы I и II группы животных продемонстрировало явления неоангиогенеза с картиной пролиферации эндотелия капилляров (Рисунок 11 А, Б).
С целью формирования общего представления картины наблюдаемого явления было проведено сравнение данных морфометрического исследования с иммуноцитохимическим анализом препаратов. По результатам расчета была определена объемная плотность ядер клеток эндотелиоцитов капилляров, в составе пульпы зубов исследуемых животных в контрольных и опытных образцах (Таблица 3.8). Сравнительный анализ морфометрических данных показал существенное превалирование эндотелиоцитов (ядер) капилляров пульпы II группы животных. Данные иммуноцитохимии согласуются с показателями морфометрии: увеличение, как количества эндотелиоцитов, так и капилляров их содержащих.
Рисунок 11 - Микрофото. Иммунопероксидазный метод с антителами к маркеру эндотелиальных клеток - антигену CD31. х 400. А - Участок пульпы зуба собаки I группы. Видны клеточные элементы соединительной ткани, сосуды микроциркуляторного русла. Б - Участок пульпы собаки II группы. Выраженные явления неоангиогенеза с картиной пролиферации эндотелия.
Для исследования влияния факторов на изменение объемной плотности одонтобластического слоя использовали параметрический t-критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони. С этой целью были построены диаграммы размаха, на которых видно изменение количества ядер одонтобластического слоя исследуемых зубов крыс и собак в сторону увеличения их числа во II группе образцов. (Рисунок 12, 13).
Для использования параметрических критериев необходимо убедиться в нормальности рапределения признака по группам, для этого были построены гистограммы (Рисунок 14, 15).
Рисунок 12 - Динамика изменения объемной плотности одонтобласти- ческого слоя в зубах крыс
Рисунок 13 - Динамика изменения объемной плотности одонтобласти-
ческого слоя в зубах собак
Рисунок 14 - Изменение числа ядер одонтобластического слоя в
сравниваемых группах (крысы)
Рисунок 15 - Изменение числа ядер одонтобластического слоя в
сравниваемых группах (собаки)
В результате анализа построенных гистограмм согласно критериям можно заключить, что для распределения изучаемого признака (объемная плотность одонтобластического слоя) противоречий не найдено.
Анализируя материалы проведеных морфологических исследований можно отметить, увеличение объемной плотности одонтобластического слоя, пульпы зубов II группы экспериментальных животных (крыс и собак) по сравнению с I группой, а так же увеличение содержания эндотелиоцитов капилляров пульпы исследуемых зубов. Увеличение содержания капиляров, несомненно, улучшает кровоснабжение тканей зуба и, очевидно, увеличивает способность клеток одонтобластического слоя к регенерации. Наличие малодифференцированых элементов среди клеток пульпы позволяют рассматривать их в качестве структурных единиц, способных трансформироваться в одонтобластические клетки, что согласуется с исследованиями Fawzy el-sayed с соавт. (2013) и R. Kabir с соавт. (2014).
3.2