16 Взятие и пересылка материала для исследования на болезни рыб

16.1 Больных или подозрительных по заболеванию инфекционными болезнями рыб доставляют в ветеринарную лабораторию в живом виде. Для исследования отбирают 10-15 рыб на различных стадиях заболевания с явно выраженными клиническими признаками болезни.

16.2 Рыб перевозят в молочных бидонах, ваннах или в других емкостях, предназначенных для перевозки живой рыбы, заполненных на 3/4 объема водой из того же водоема, откуда взята рыба, или из артезианской скважины.

Летом при длительной транспортировки воду с рыбой постепенно охлаждают до температуры 12-15^оС, добавляя мелкие кусочки льда. Чтобы не вызвать у рыб температурного шока и простудных явлений, нельзя пересаживать рыбу в воду, имеющую температуру на 7° и более ниже, чем в водоеме.

16.3 Если нет возможности доставить живую рыбу, то у крупных рыб берут кусочки пораженных органов и тканей, помещают их в стерильную стеклянную посуду, закрывают пробкой, заливают парафином и направляют с нарочным в лабораторию. Жидкий патологический материал (кровь, экссудат и т.д.) доставляют в запаянных стерильных пастеровских пипетках.

Летом бактериологические исследования патологического материала следует проводить не позднее чем через 2 часа после его взятия. В исключительных случаях делают бактериологические посевы на МПБ и МПА в лаборатории рыбхоза.

16.4 Для вирусологического исследования берут кусочки из пораженных органов и тканей весом не более 3-5 г, замораживают или консервируют в 50%-ном растворе химически чистого глицерина (рН 7,2-7,4) в соотношении 1:5-1:10, помещают в стерильные стеклянные флаконы, закрывают резиновой пробкой и заливают парафином.

16.5 Материал для гистологического исследования берут от павших и вынужденно убитых рыб. Мелких рыб (мальки и сеголетки) после вскрытия брюшной полости фиксируют целиком, а от крупных берут органы или кусочки органов размером 2х3 см и толщиной 0,5-1,0 см.

Кусочки из пораженных органов и тканей вырезают так, чтобы были захвачены нормальные и пораженные участки.

Независимо от степени поражения берут кусочки из различных органов: кожи с подлежащей мускулатурой, жабр, печени, почек, селезенки, сердца, кишечника, плавательного пузыря, головного мозга.

Кишечник перед фиксацией осторожно вскрывают или делают на нем несколько надрезов, чтобы фиксирующая жидкость проникла в его полость. Головной мозг осторожно извлекают целиком после вскрытия черепной коробки. Подлежащий исследованию материал помещают в широкогорлую стеклянную банку и фиксируют обычным способом.

16.6 Для гистохимических исследований патологический материал фиксируют в 96%-ном этиловом спирте, жидкости Карнуа (96%-ный спирт 60 мл, хлороформ 30 мл и ледяная уксусная кислота 10 мл) или жидкости Буэна (концентрированная пикриновая кислота 15 мл, формалин 5 мл, ледяная уксусная кислота 1 мл). Так как выбор фиксатора зависит от цели дальнейшей обработки материала, то на этикетке указывают фиксирующий раствор.

16.7 Кровь для исследования берут из хвостовой артерии или из сердца. Чешую на месте взятия крови слущивают скальпелем, кожу вытирают от слизи и дезинфицируют 70%-ным спиртом. Кровь насасывают в пастеровскую пипетку, затем переносят на часовое стекло и быстро отбирают количество, необходимое для гематологических исследований (подсчета количества форменных элементов, определения гемоглобина, приготовления мазков и т.д.).

Мазки крови для исследований на кровепаразитов и выведения лейкоцитарной формулы готовят обычным способом. Высушенные мазки нумеруют иглой, остро отточенным карандашом или углом стекла на конце мазка или посередине и доставляют завернутыми по отдельности в чистой бумаге.

16.8 Для биохимических исследований цельную кровь предохраняют от свертывания, добавляя к ней лимоннокислый или щавелевокислый натрий (на 1 мл 2 мг), 1-2%-ный раствор гепарина (на 1 мл от 0,01 до 0,04 мл), и доставляют в лабораторию в герметически закрытых стеклянных сосудах (пробирках), снабженных этикеткой.

16.9 Сыворотку крови для биохимических и серологических исследований получают следующим образом. Кровь вносят в небольшие пробирки и оставляют при комнатной температуре для свертывания. Через некоторое время сыворотка отделяется от кровяного сгустка, и ее отсасывают. Для лучшего сохранения сыворотку, предназначенную для серологических исследований, консервируют одним из следующих растворов: 2%-ной борной кислотой, 0,05%-ной карболовой кислотой (1-2 капли 5%-ного раствора карболовой кислоты на 1 мл сыворотки) или тиомерсалом 1:10 000.

Сыворотку крови, предназначенную для биохимических исследований, отбирают стерильно пастеровскими пипетками и доставляют в запаянных стерильных ампулах Цельную кровь и сыворотку транспортируют в термосе со льдом. Материал должен быть доставлен в лабораторию и течение суток и в исключительных случаях не позднее 3 дней после взятия крови.

16.10 Рыб, больных инвазионными болезнями, пересылают в лабораторию в живом виде, как указано в пункте 10.2.

В ряде случаев допускается транспортировка целых рыб (сеголетки, годовики) или кусочков органов, завернутых в пергаментную бумагу или целлофан (обычную упаковочную бумагу или газету использовать нельзя), в термосе со льдом или в леднике.

У крупных рыб извлекают пораженные паразитами органы (жабры, кишечник, печень и другие ткани) и посылают для исследования законсервированными в банках.

Целых рыб (сеголетки, годовики, двухлетки) или кусочки органов и тканей с паразитами консервируют в 70%-ном этиловом спирте или 4%-ном растворе формалина, хотя некоторые паразиты (особенно мелкие) при этом могут быть утеряны.

16.11 Обнаруженных при клиническом осмотре и паразитологическом вскрытии рыб паразитических организмов, а также кусочки органов и тканей с наличием в них паразитов помещают в пробирки или флаконы с консервирующей жидкостью.

16.12. Протозойных паразитов наносят па покровное или предметное стекло и, не давая мазку подсохнуть опускают в жидкость Шаудина (50 мл насыщенного раствора сулемы и 25 мл спирта) на 20 минут.

16.13 Гельминтов, прежде чем консервировать, тщательно промывают в воде или физиологическом растворе.

16.14 Моногенетических сосальщиков консервируют в 4%-ном растворе формалина.

16.15 Трематод и мелких цестод помещают на предметное стекло, накрывают покровным стеклом или куском предметного стекла (для нежного прессования), заливают 70%-ным спиртом и оставляют на несколько часов. После этого гельминтов перекладывают при помощи кисточки в пробирку (флакон) со спиртом. Одновременно часть умерщвленных в физиологическом растворе трематод (цестод), не подвергая прессованию (для сохранения естественной формы), помещают в пробирку с 70%-ным спиртом.

16.16 Нематод и личиночные стадии цестод консервируют в жидкости Барбагалло. Для изготовления постоянных микропрепаратов в канадском бальзаме лучше пользоваться консервированием живых нематод в 70%-ном горячем спирте.

16.17 Крупных ленточных гельминтов после умерщвления в физиологическом растворе помещают в 70%-ный спирт.

16.18 При консервировании скребней в 70%-ном спирте добиваются выдавливания хоботка из влагалища путем слабого прессования передних концов с помощью покровных стекол.

16.19 Паразитических рачков консервирую в 3%-ном растворе формалина и сразу же переносят для хранения в 70%-ный спирт.

16.20 Пиявок фиксируют в 1-2%-ном растворе формалина.

16.21 Патологический материал для бактериологических, паразитологических и других исследований снабжают этикеткой с обозначением вида и возраста рыбы, названия органа, из которого взят материал, времени и места вылова рыбы и взятия материала. Если в одну посуду помещают несколько объектов исследования, то этикетку хорошо прикрепляют к каждой рыбе (мальку, сеголетку) или органы и их кусочки завязывают вместе с этикеткой в марлю.

16.22 При подозрении на отравления рыб стоками промышленных предприятий отбирают в местах общего выпуска среднесменные, по возможности среднесуточные пробы по 2-3 л.

Из водоема также берут пробы воды в количестве 2-3 л так, чтобы проба соответствовала всей массе исследуемой воды. Если водоем проточный, пробу берут на быстринах, перепадах, водосбросах и водоспусках. Пробы берут батометром из поверхностных (30-50 см от зеркала воды) и глубинных слоев. Воду для химического анализа отбирают в чисто вымытые (без мыла) склянки. Перед наполнением склянку промывают 2-3 раза исследуемой водой. При транспортировке проб зимой их нужно утеплить. Если доставка в лабораторию в теплое время займет свыше суток, взятые пробы консервируют. Для этого в одну пробу воды добавляют хлороформ из расчета 2 мл на каждый литр воды и хорошо взбалтывают.

16.23 Для химико-токсикологического исследования доставляют в лабораторию живых или недавно погибших рыб не менее пяти экземпляров каждого вида. Если доставить живых или свежеуснувших рыб невозможно, их консервируют спиртом-ректификатом. Консервировать материал другими веществами нельзя.

16.24 Грунт для исследования берут со дна водоема дночерпателем в количестве 2 кг. Грунт сушат на воздухе, растирают в ступке, просеивают через мелкое сито и упаковывают в широкогорлые банки или полиэтиленовые мешочки по 500 г в каждый.

16.25 Планктон берут планктонной сеткой. Для этого 50-100 л воды пропускают через сетку и собирают планктон.

16.26 Весь взятый для исследования материал: пробы воды, грунта, планктона и рыб упаковывают в тару, опечатывают и вместе с актом обследования водоема направляют в лабораторию с нарочным.