Влияние нейролипинов на нейрональный апоптоз
Модель калиевой депривации является одним из распространенных способов изучения нейронального апоптоза. Нейроны мозжечка крысы сохраняют жизнеспособность при культивировании в среде с повышенным содержанием ионов калия (25 мМ).
При понижении концентрации калия до 5-10 мМ в течение 18-24 часов наблюдается массовая гибель нейронов по пути апоптоза (D’Mello et al., 1993). В данной модели были протестированы аналоги анандамида, 2АГ, АСТ и АДА. В исходной постановке опыта все вещества исследовали в трех концентрациях: 0.1, 1, 10 мкМ. Анандамид, 2АГ и АСТ, а также их аналоги в данном тесте оказались неактивны. Среди N-ацилдофаминов нейрозащитное действие проявили АДА и N-докозагексаеноилдофамин (ДДА, 1a-5e). Максимальный эффект наблюдали при концентрации 10 мкМ: 59% и 39% выживших клеток для АДА и ДДА, соответственно. Для этих соединений было проведено исследование зависимости защитного эффекта от концентрации (рис. 4).АДА увеличивал выживаемость нейронов в диапазоне концентраций 1-15 мкМ (30-65% выживших клеток), тогда как ДДА был активен в интервале 5-30 мкМ (10-85% выживших клеток). Применение антагонистов каннабиноидных, ванило- идных и дофаминовых рецепторов показало, что эффекты N-ацилдофаминов реализуются преимущественно за счет КР2 и ВР1 (рис. 5). Аналоги АДА с модификациями в дофаминовой части не оказывали достоверного защитного действия (Генрихс и др., 2010а).
С учетом биохимических характеристик нейролипинов, описанных выше, нами была применена комбинация соединений, состоящая из нейролипина и ингибитора его гидролиза. Были использованы АДА и ДДА в комбинации с наиболее активным ингибитором ГАЖК N-эйкозапентаеноилсеротонином (ЭСТ, 1c-4b).
Было установлено, что ЭСТ снижает эффективную концентрацию АДА и ДДА в условиях К+-депривации. В присутствии АДА (5 мкМ) и ДДА (10 мкМ) выжива-
Рис. 4. Защитное действие АДА (А) и ДДА (Б) на нейроны мозжечка крысы в модели К+-депри- вации: инкубация 18 ч в среде с пониженной концентрацией К+ (9 мМ) в присутствии нейролипинов Жизнеспособность определяли МТТ-тестом. p