Реакция гемолиза

При постановке реакции гемолиза используют бараньи эритроциты, гемолитическую сыворотку, содержащую специфические к ним гемолизины, и комплемент. Протекает она в две фазы: в первой - эритроциты взаимодействуют с гемолизинами сыворотки, во второй - сенсибилизированные лизинами эритроциты растворяются под действием комплемента.

Гемолиз происходит при наличии строго определенного соотношения используемых в реакции ингредиентов (табл. 1).

Бараньи эритроциты для реакции гемолиза получают в день ее постановки. Кровь дефибринируют во флаконе со стеклянными бусами, далее готовят 3%-ную взвесь, отмывая эритроциты изотоническим раствором натрия хлорида при центрифугировании.

Гемолитическую сыворотку готовят в производственных институтах, вводя кроликам парентерально 3-4 раза по 2-5 мл 50%-ной взвеси бараньих эритроцитов. Для реакции гемолиза пригодна сыворотка с титром не ниже 1:1200, но в опыт берется в тройном титре, т.е., если титр гемолитической сыворотки равен 1:1200, то используют титр 1:400.

Таблица 1. Схема постановки реакции гемолиза

Титром гемолитической сыворотки называют ее максимальное разведение, которое в присутствии комплемента при 37 °С вызывает полный гемолиз бараньих эритроцитов в течение 1 ч.

В качестве комплемента применяют сыворотку крови морских свинок, точнее, производственный сухой комплемент, который при правильном хранении не теряет своей активности 1-2 года.

Учет реакции производят через 1 ч после инкубации пробирок в термостате при температуре 37 °С.

Реакцию гемолиза используют для определения количества комплемента в сыворотке крови людей, но чаще - как индикатор в реакции связывания комплемента.